[發明專利]一種β?1,3/1,6?葡聚糖及其制備方法和在制備免疫增強和抗腫瘤的藥物和功能性食品中的應用

有效

• 申請號: 201510409825.3
• 申請日: 2015-07-14
• 公開（公告）號: CN105001352B
• 公開（公告）日: 2017-04-26
• 發明（設計）人: 于廣利;郝杰杰;叢大鵬;管華詩;趙峽;呂友晶;胡婷
• 申請（專利權）人: 青島海大海洋生物醫藥銷售有限公司
• 主分類號: C08B37/02
• 分類號: C08B37/02;A61K31/716;A23L33/125;A61P37/04;A61P35/00
• 代理公司: 青島致嘉知識產權代理事務所(普通合伙)37236
• 代理人: 劉曉

技術領域

本發明屬于海洋藥物領域，涉及利用海藻制備高純度低分子量葡聚糖的方法及其應用，尤其涉及一種β-1,3/1,6-葡聚糖及其制備方法和在制備免疫增強和抗腫瘤的藥物和功能性食品中的應用。

背景技術

葡聚糖(Glucan)是一種以葡萄糖為唯一組成單元的多糖物質，廣泛存在于動植物和微生物以及褐藻中。自然界中的葡聚糖種類很多，有直鏈或分支的α/β-葡聚糖，葡萄糖之間其連接方式有1,2-連接、1,3-連接、1,4-連接和1,6-連接等形式，其中β-1,3及β-1,6-葡聚糖有較好的生物活性,如抗腫瘤、增強免疫、促傷口愈合、抗輻射及預防高脂血癥等。據世界衛生組織統計，在未來的20年,癌癥病例將由2012年的1400萬上升到2200萬。中國每天有8550人成為癌癥患者，每七到八人中就有一人死于癌癥。癌癥治療除了手術療法和放化療法外，免疫療法是一種安全可靠的療法之一，其中通過免疫增強執行抗腫瘤作用的β-1,3-葡聚糖的市場需求量很大。β-1,3-葡聚糖除了用做免疫增強和抗腫瘤作用外，在代用血漿、預防口腔黏膜潰瘍以及化妝品等行業中也具有廣泛的用途，市場應用前景廣闊。

目前，市場上β-1,3-葡聚糖多來自于大麥、燕麥、食用真菌(香菇，灰樹花，裂褶菌)、酵母等陸生生物，由于原料來源不同，所得β-1,3-葡聚糖的分子量、連接方式及分支度等差別很大，質量很難控制，如注射藥用的β-葡聚糖主要來源于香菇，是一種具有β-1,6-分支的β-1,3-葡聚糖，由于其分子量高達400-800kDa，水溶性較差。隨著β-葡聚糖應用領域的不斷擴大，市場需求量的不斷增長，現有的香菇β-葡聚糖已不能滿足市場的需要。

在海藻來源葡聚糖制備方面，經過專利檢索發現有1項中國發明專利(專利號201010169739.7)涉及了海藻低分子葡聚糖的制備方法，其原料是海帶，裙帶菜和羊棲菜，所用方法是采用80％乙醇分級沉淀以及雙氧水氧化的方法，所得到的產品分子量只有800-1000道爾頓(Da)，結構不明確，也未見其有抑制腫瘤生長與轉移的活性。

發明內容

本發明的目的在于提供了一種β-1,3/1,6-葡聚糖及其制備方法和在制備免疫增強和抗腫瘤的藥物和功能性食品中的應用，所述β-1,3/1,6-葡聚糖從南極褐藻中制備而得，細胞和動物實驗均表明其安全性高，且具有顯著的免疫增強和抗腫瘤活性，具有開發為免疫增強和抗腫瘤作用的潛力，能彌補市場藥用β-1,3/1,6-葡聚糖缺乏的需求。

為實現上述發明目的，本發明的技術方案是：

一種β-1,3/1,6-葡聚糖，它從南極褐藻中提取獲得，所述β-1,3/1,6-葡聚糖以β-1,3-葡萄糖為主鏈，以β-1,6-葡萄糖為支鏈，重均分子量為5～50kDa；所述β-1,3/1,6-葡聚糖中葡萄糖的含量為90wt％～98wt％，粗蛋白含量0.5％wt-2.5％wt，其余為水分。

所述南極褐藻為海茸、海筍或雷松藻。

本發明還提供了所述的β-1,3/1,6-葡聚糖的制備方法，它包括以下步驟：

(1)脫脂：將南極褐藻烘干、粉碎，有機溶劑浸泡、攪拌，得脫脂藻粉；

(2)水提：所述脫脂藻粉室溫下用水攪拌提取得水提液；

(3)分級：將步驟(2)所得水提液離心，在離心獲得的上清液中加入1～3mol/L氯化鈣水溶液；攪拌后離心，取上清液進行透析或超濾脫鹽，減壓濃縮干燥獲得粗多糖；

(4)純化：將步驟(3)所述粗多糖用蒸餾水溶解，以蒸餾水和氯化鈉水溶液為流動相，經過陰離子交換樹脂分離純化，硫酸苯酚法檢測，收集水洗脫組分，減壓濃縮、凍干，獲得所述β-1,3/1,6-葡聚糖。

對上述技術方案的進一步改進，所述步驟(1)中加入的有機溶劑的體積與藻粉的質量比例為10～20：1，采用浸泡或間歇攪拌脫脂2～8h，所用有機溶劑為乙醇、丙酮或甲醇混合溶液之一種或幾種。

對上述技術方案的進一步改進，所述步驟(3)中加入氯化鈣水溶液的體積為提取液體積的1～3倍，透析或超濾所用膜的截留分子量為1000～3000Da。

對上述技術方案的進一步改進，所述步驟(4)中所述陰離子交換樹脂純化所用氯化鈉水溶液濃度為0.0～2.0mol/L，洗脫2～8個柱體積。

本發明還提供了所述的β-1,3/1,6-葡聚糖在制備免疫增強和抗腫瘤的藥物和功能性食品中的應用。

所述β-1,3/1,6-葡聚糖濃度為5～100μg/mL時，具有促進巨噬細胞吞噬中性紅的作用。