[發(fā)明專利]mo-miR-211在制備腎毒性生物標(biāo)志物中的用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510405953.0
• 申請(qǐng)日: 2015-07-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105039537B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邱云良;馬璟;洪敏;富欣;湯納平;李華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海益諾思生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 上海弼興律師事務(wù)所 31283
• 代理人: 薛琦;沈利

本發(fā)明公開(kāi)了一種mo?miR?211在制備腎毒性生物標(biāo)志物中的用途及試劑盒和引物。mo?miR?211可以作為唯一的腎毒性生物標(biāo)志物單獨(dú)使用，也可以與常規(guī)的腎毒性生物標(biāo)志物聯(lián)合使用，并在檢測(cè)外源性化合物引起的腎損傷中發(fā)揮作用。所述的試劑盒能夠特異性強(qiáng)、可行性高地檢測(cè)腎毒性生物標(biāo)志物，從而檢測(cè)外源性化合物引起的腎損傷。所述的引物能夠特異性強(qiáng)地?cái)U(kuò)增mo?miR?211，并應(yīng)用于所述的試劑盒中檢測(cè)外源性化合物引起的腎損傷。

本申請(qǐng)要求申請(qǐng)日為2014年7月10日，申請(qǐng)?zhí)枮?01410328045.1，發(fā)明名稱為“一種腎毒性生物標(biāo)志物及其用途”的中國(guó)專利申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)。本申請(qǐng)引用該中國(guó)專利申請(qǐng)的全文。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種mo-miR-211在制備腎毒性生物標(biāo)志物中的用途及試劑盒和引物。

背景技術(shù)

腎臟是體內(nèi)最重要的排泄器官，也是外源性毒物在體內(nèi)的主要靶器官之一。很多化合物(藥物)進(jìn)入體內(nèi)可引起腎臟毒性損傷，據(jù)調(diào)查，急性腎功能衰竭中有32.4％是由于藥物腎毒性引起的。因此急需建立發(fā)現(xiàn)和確證新的腎毒性生物標(biāo)志物，能夠早期發(fā)現(xiàn)腎損傷，并可以反映出腎臟損傷的改善或加重，甚至能反映損傷的機(jī)制。

當(dāng)前常規(guī)的腎毒性評(píng)價(jià)方法，非臨床藥物安全性評(píng)價(jià)和臨床上常用的腎損傷指標(biāo)為血清肌酐(CRE)和尿素氮(BUN)，再進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。CRE易受年齡、性別、種族、飲食和機(jī)體內(nèi)環(huán)境的影響，并且無(wú)法預(yù)測(cè)早期病變，不能反映腎小管的損傷和壞死；BUN不僅受腎功能的影響，還受腎外因素如高蛋白飲食、消化道出血等的影響。而且兩者需要病人發(fā)生急性腎損傷(AKI)幾天后才有限制升高，會(huì)延誤腎毒性早期發(fā)現(xiàn)、診斷和治療。

隨著腎毒性研究的深入，發(fā)現(xiàn)了一些新的腎臟毒性損傷的檢測(cè)指標(biāo)，如尿總蛋白(uTP)、血清胱氨酸蛋白酶抑制劑C(CysC)作為藥物腎小球損傷的生物標(biāo)記物；叢生蛋白、腎損傷分子(KIM-1)、三葉因子-3(TFF-3)可作為腎小管損傷的生物標(biāo)志物，但是存在敏感性、特異性及檢測(cè)方法的問(wèn)題，難以取代傳統(tǒng)的腎毒性檢測(cè)。因此，尋找及時(shí)、可靠、可行性強(qiáng)的腎毒性的生物標(biāo)記物十分有意義。

miRNA是一類內(nèi)源性、非編碼、單鏈小RNA。它們可以和靶基因mRNA-3’端非翻譯區(qū)(3’-UTR)部分或全部互補(bǔ)結(jié)合，在翻譯后水平調(diào)節(jié)基因表達(dá)，導(dǎo)致靶基因出現(xiàn)翻譯抑制或mRNA降解。成熟miRNA大小約18到25個(gè)核苷酸。它們首先在細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄形成初級(jí)miRNA(pri-miRNA)，然后在由RNAase III、Dicer和Drosha形成的蛋白復(fù)合體以及RNA聚合酶II的作用下形成前體miRNA(pre-miRNA)。pre-miRNA從細(xì)胞核進(jìn)入細(xì)胞漿內(nèi)，被Dicer酶切為約22個(gè)核苷酸的雙鏈miRNA。隨后雙鏈被切斷，形成一條成熟的單鏈miRNA。單鏈miRNA和RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體結(jié)合并選擇性作用靶基因mRNA的反義互補(bǔ)序列，最終調(diào)控靶基因的表達(dá)。

發(fā)明內(nèi)容

因此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有的腎毒性生物標(biāo)記物不夠特異、不能早期發(fā)現(xiàn)檢測(cè)、檢測(cè)方法過(guò)于復(fù)雜等的問(wèn)題，提供一種mo-miR-211在制備腎毒性生物標(biāo)志物中的用途及試劑盒和引物。所述的用途能夠?qū)o-miR-211應(yīng)用于腎毒性生物標(biāo)志物的制備從而檢測(cè)外源性化合物引起的腎損傷；所述的試劑盒能夠特異性檢測(cè)外源性化合物引起的腎損傷；所述的引物能夠特異性擴(kuò)增用以制備腎毒性生物標(biāo)志物的mo-miR-211。

本發(fā)明提供rno-miR-211作為腎毒性生物標(biāo)志物的用途。

本發(fā)明中，所述的rno-miR-211是一種miRNA。本發(fā)明中，大鼠的rno-miR-211，具有序列表中SEQ ID No.1所述的堿基序列。

本發(fā)明中所述的腎毒性較佳地來(lái)源于外源性化合物引起的腎損傷。所述的rno-miR-211作為腎毒性生物標(biāo)志物可以用于檢測(cè)外源性化合物引起的腎損傷。