[發(fā)明專利]用于授精的精子懸浮液

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510400906.7
• 申請(qǐng)日: 2005-03-29
• 公開（公告）號(hào): CN104974983A
• 公開（公告）日: 2015-10-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: J·A·格雷厄姆;C·L·路德維格;K·S·克勞利
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 英格朗公司
• 主分類號(hào): C12N5/076
• 分類號(hào): C12N5/076;A01N1/02;A61D19/02
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所 11247
• 代理人: 凌立;黃革生

本申請(qǐng)是申請(qǐng)人于2005年3月29日提交的題為“用于授精的精子懸浮液”的中國專利申請(qǐng)200580017376.2的分案申請(qǐng)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明主要涉及貯存精子細(xì)胞的方法。更具體地，本發(fā)明涉及貯存運(yùn)動(dòng)性比體內(nèi)射出精子降低的分選及未分選精子的方法，提供該精子分散體系用于授精雌性哺乳動(dòng)物的方法，利用該精子分散體系授精雌性哺乳動(dòng)物的方法。

背景技術(shù)

通過人工授精(AI)使動(dòng)物受精以及體外受精后的胚胎移植已經(jīng)是成熟的技術(shù)。由于用于這些操作的精子的存活力和運(yùn)動(dòng)性會(huì)影響其結(jié)局(即，該受精和授精過程是否能成功產(chǎn)生后代)，精子細(xì)胞能夠耐受授精過程中通常伴隨的困難(包括如細(xì)胞的收集、貯存和運(yùn)輸)至關(guān)重要。

例如，在家畜產(chǎn)業(yè)中，常希望可對(duì)繁殖結(jié)果產(chǎn)生影響，而使其后代具有一種或多種優(yōu)選性狀的能力，如得到特定性別的后代。為達(dá)到這樣的結(jié)局，從雄性哺乳動(dòng)物收集精液樣品，以染料染色，然后分選為帶有X和Y染色體的細(xì)胞，任選在冰凍或冷卻狀態(tài)下貯存一段時(shí)間，然后運(yùn)輸至育種地點(diǎn)，最終在該處對(duì)雌性哺乳動(dòng)物授精。這該過程中的每一步均對(duì)于精子細(xì)胞產(chǎn)生壓力，導(dǎo)致精子細(xì)胞的存活力或運(yùn)動(dòng)性，特別是前向性運(yùn)動(dòng)性(progressive?motility)降低。

Salisbury等人描述了將公牛射出的精液直接收集至稀釋液中的技術(shù)，所述稀釋液抑制細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)性并防止其從周圍精漿中吸收糖類。當(dāng)收集射出精液至該稀釋液中且將液體上的氣相替換為100％的CO₂時(shí)，射出精液內(nèi)的細(xì)胞會(huì)不再運(yùn)動(dòng)。只要將細(xì)胞留存于該稀釋液中且排除空氣，該細(xì)胞就可在室溫下幾小時(shí)內(nèi)保持不運(yùn)動(dòng)，5℃下至少約8天保持不運(yùn)動(dòng)。

發(fā)明概述

本發(fā)明的多方面之一是在貯存、運(yùn)輸或受精中減少精子運(yùn)動(dòng)的方法，從而保護(hù)精子免受這些過程中的困難。因此在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，形成了包含精子和下調(diào)精子糖類攝取的組合物的精子分散體系(有時(shí)也稱為精子懸浮液)。

簡(jiǎn)言之，本發(fā)明因此涉及貯存未分選精子的方法，所述方法包括形成包含精子、誘導(dǎo)精子不運(yùn)動(dòng)的組合物以及抗生素的精子分散體系，以及貯存該精子分散體系。

本發(fā)明還涉及貯存分選的精子的方法，所述方法包括形成包含精子、誘導(dǎo)精子不運(yùn)動(dòng)的組合物的精子分散體系，將該精子分散體系分選為分離群體，并于約-4℃至約30℃的溫度下貯存一個(gè)群體，其中所述群體之一中的精子包括至少約65％帶有X染色體的精子細(xì)胞或至少約65％帶有Y染色體的精子細(xì)胞。

本發(fā)明還涉及授精雌性哺乳動(dòng)物的方法，該方法包括用精子分散體系授精雌性哺乳動(dòng)物，所述精子分散體系包含不運(yùn)動(dòng)的精子和誘導(dǎo)精子不運(yùn)動(dòng)的組合物。

本發(fā)明還涉及提供新鮮精子分散體系來授精雌性哺乳動(dòng)物的方法，該方法包括形成包含精子和誘導(dǎo)精子不運(yùn)動(dòng)的組合物的精子分散體系、將該精子分散體系置于容器中用以進(jìn)行遠(yuǎn)距離運(yùn)輸，并在形成精子分散體系后的約24小時(shí)內(nèi)將該容器內(nèi)的精子分散體系進(jìn)行遠(yuǎn)距離運(yùn)輸。

本方面還涉及包括用于授精雌性哺乳動(dòng)物的細(xì)長容器和精子分散體系的組合，所述精子分散體系包括不運(yùn)動(dòng)的精子和誘導(dǎo)精子不運(yùn)動(dòng)的組合物。精子分散體系包含在該細(xì)長容器中。

本發(fā)明還涉及包含不運(yùn)動(dòng)的精子、誘導(dǎo)精子不運(yùn)動(dòng)的組合物以及冷凍防腐劑的精子分散體系。該精子分散體系中也可包含增強(qiáng)精子存活力的添加劑，例如，抗生素、生長因子、己酸、過氧化氫酶或調(diào)節(jié)胞內(nèi)和/或胞外氧化/還原反應(yīng)的組合物。

本發(fā)明的其他方面和特征部分是顯而易見的，部分將于此后說明。

發(fā)明詳述

出人意料的是，已經(jīng)證明相對(duì)于體內(nèi)射精精子(相同種系)，運(yùn)動(dòng)性降低的精子，更具體而言是運(yùn)動(dòng)性暫時(shí)降低的精子，往往不必冷凍就更能耐受貯存和運(yùn)輸過程。大約從來源哺乳動(dòng)物收集精子時(shí)起，就可以將精子保存在運(yùn)動(dòng)性降低的狀態(tài)下，直至用該不運(yùn)動(dòng)精子授精雌性哺乳動(dòng)物。因此，在優(yōu)選實(shí)施方案中，可以制備特定濃度的新鮮未冰凍精子(分選或未分選的)用于貯存、運(yùn)輸或受精，所述精子相對(duì)于冰凍后解凍的相同濃度的精子而言，其中活細(xì)胞的數(shù)目增加或可運(yùn)動(dòng)精子的數(shù)目增加。