[發明專利]一種基于二硫化鉬復合材料構建的雌二醇電化學免疫傳感器的制備方法

有效

• 申請號: 201510399069.0
• 申請日: 2015-07-09
• 公開（公告）號: CN105067690A
• 公開（公告）日: 2015-11-18
• 發明（設計）人: 張勇;李嬌嬌;杜斌;王耀光;吳丹;魏琴
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N33/74
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種基于無機納米復合材料構建的無標記電化學免疫傳感器的制備方法，所制備的傳感器可用于雌二醇的檢測。屬于新型納米功能材料與傳感檢測技術領域。

背景技術

雌二醇是一種環境雌激素類化學物質。環境雌激素具有類似生物體內雌激素的活性，進入人體后具有模擬雌激素的作用，通過擾亂人體內分泌、免疫、神經等系統的正常功能而產生如致癌、損害生殖發育系統、免疫系統、神經系統等多種疾病，是一類嚴重危害人類健康的環境毒素。快速、靈敏的定性、定量檢測環境樣品中的雌二醇對于人們的生產和生活具有重要的意義。

電化學免疫傳感器由于其靈敏度高、特異性好、操作簡便等優點被廣泛應用于臨床分析和環境檢測領域，其中，無標記電化學免疫傳感器因其制備相對簡單、受環境影響小等優點，具有更廣闊的應用前景。構建無標記的電化學免疫傳感器，關鍵的技術是提高修飾電極對抗體的固定量和對測試底液的信號響應速度和大小。

二硫化鉬，化學式為MoS₂，英文名稱為molybdenumdisulfide，是輝鉬礦的主要成分，是應用最廣泛的固體潤滑劑之一。其納米二維結構，是性能優異的半導體納米材料，除了具有大的比表面積，可以作為催化劑和生物抗體的載體，提高負載量，同時作為助催化劑也具有優良的電子傳遞性能。

目前，大多數的合成手段都是分開合成后，再將催化劑與載體進行復合，過程繁瑣，產率不高。因此，對于一鍋法制備具有優良催化性能的催化劑具有廣泛的應用前景和重要的科學意義。

發明內容

本發明的目的在于提供一種制備簡單、靈敏度高、特異性強的可用于雌二醇檢測的電化學免疫傳感器的制備方法，所制備的傳感器，可用于雌二醇的靈敏、快速檢測。基于此目的，本發明先采用一鍋法制備出二硫化鉬/鐵鈀合金納米復合材料MoS₂/FePd，并利用其對電極進行修飾，有效提高了電極的比表面積，增大了抗體的吸附量；并且極大增強了電極的電子響應速度和對測試底液的電催化信號強度等性能；然后通過吸附作用，固定雌二醇抗體。在進行檢測時，利用抗體與抗原的特異性定量結合，使得電極對H₂O₂的電流響應信號相應降低，從而實現了采用無標記的電化學方法檢測雌二醇的免疫傳感器的構建。

本發明采用的技術方案如下：

1.一種基于二硫化鉬復合材料構建的雌二醇電化學免疫傳感器的制備方法，其特征在于，制備步驟為：

（1）取35mL的十六烷基三甲基溴化銨CTAB溶液，加入0.02~0.06g六水合三氯化鐵FeCl₃·6H₂O和2~6mL的氯鈀酸H₂PdCl₄溶液，攪拌15分鐘后，繼續攪拌并相繼加入2~6mL的抗壞血酸溶液，0.5~1.5mL的鉬酸鈉Na₂MoO₄溶液和0.01~0.03g硫化鈉Na₂S，攪拌15分鐘后，放入反應釜中，在150~220℃下，反應12~16小時；冷卻至室溫后，使用去離子水離心洗滌，在40℃下進行真空干燥，即制得二硫化鉬/鐵鈀合金納米復合材料MoS₂/FePd，將其溶于去離子水制得MoS₂/FePd溶液；

（2）以直徑4mm的玻碳電極為工作電極，在電極表面滴涂5~12μL的MoS₂/FePd溶液，室溫下晾干；

（3）將步驟（2）中得到的電極用去離子水清洗，室溫下晾干成膜，在電極表面滴涂5~12μL的雌二醇抗體溶液，4℃冰箱中保存晾干；

（4）將步驟（3）中得到的電極用去離子水清洗，繼續在電極表面滴涂5~10μL的牛血清白蛋白BSA溶液，4℃冰箱中保存晾干，用去離子水清洗，4℃冰箱中晾干成膜，制得無標記電化學免疫傳感器；

所述的CTAB溶液的濃度為0.1mol/L，所述的H₂PdCl₄濃度為0.03mol/L，所述的抗壞血酸溶液濃度為0.3mol/L，所述的Na₂MoO₄溶液濃度為0.1mol/L；

所述的MoS₂/FePd溶液濃度為1mg/mL；

所述的雌二醇抗體溶液濃度為10μg/mL；

所述的BSA溶液濃度為100μg/mL。