[發明專利]多倍體千斤拔及其培育方法

有效

• 申請號: 201510389929.2
• 申請日: 2015-07-06
• 公開（公告）號: CN105145349B
• 公開（公告）日: 2018-05-04
• 發明（設計）人: 蘇鈺琴;盤飛蘭;莫燕蘭;李翠蘭;蔣向軍;蔣珍藕;張華英
• 申請（專利權）人: 蔣向軍;張華英
• 主分類號: A01H1/08
• 分類號: A01H1/08;A01H4/00
• 代理公司: 桂林市持衡專利商標事務所有限公司45107
• 代理人: 唐智芳

技術領域

本發明涉及生物技術育種領域，具體涉及多倍體千斤拔及其培育方法。

背景技術

千斤拔Moghania philippinens(Merr.et Rolfe)Li.為豆科千斤拔屬植物，別名蔓千斤拔、吊馬樁、吊馬墩、一條根、老鼠尾、鉆地風(四川)等，以根入藥，主要分布于云南、四川、貴州、湖北、湖南、廣西、廣東、海南、江西、福建和臺灣。已有的研究表明，千斤拔皂苷對修復神經損傷、治療老年性癡呆、抗炎鎮痛、增強免疫、抗疲勞、抗缺氧有明顯作用，中國醫科院、中國藥科大學等都設置了專門的新藥研究課題，澳大利亞等國已進入藥理實驗階段。千斤拔還是國內制藥企業用于生產治療婦科炎癥、風濕骨痛、跌打損傷、壯腰健腎類藥品不可或缺的原料。現有常規二倍體千斤拔藥材的單株產量較低，根部纖維含量較高，不利于其中有效成分的提取。

通過倍數性育種手段使千斤拔基因組多倍化，可以獲得株型大、藥材產量高、出膏率高的品種。目前尚未發現有多倍體千斤拔及其培育方法的相關報道。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種多倍體千斤拔及其培育方法。該方法以特定濃度的秋水仙素為誘導劑，通過人工誘導獲得千斤拔同源四倍體品種，繼而再獲得三倍體千斤拔。

本發明所述多倍體千斤拔及其培育方法包括四倍體千斤拔以及它的培育方法、三倍體千斤拔以及它的培育方法。

具體地，本發明包括四倍體千斤拔的培育方法，包括以下步驟：

1)獲取二倍體千斤拔的種子苗；

2)選取生長勢強的種子苗經暗培養后，以秋水仙素為誘導劑，采用液體或固體法誘導種子苗產生染色體基因組倍數性變化，之后轉入分化培養基中進行光照培養，獲得叢生芽；其中：

所述采用固體法誘導種子苗產生染色體基因組倍數性變化是指：將經暗培養的種子苗轉接到含有0.015～0.035％質量秋水仙素的MS固體培養基中，于5～10℃條件下培養2～5d；

所述采用液體法誘導種子苗產生染色體基因組倍數性變化是指：在無菌條件下，將經暗培養的種子苗浸泡于經過滅菌的質量濃度為0.05～0.1％秋水仙素溶液中8～10h；

3)切取叢生芽轉入生根培養基中培養成根莖葉完整的植株；

4)對所得植株進行染色體數目檢測，篩選出四倍體植株(染色體數目2n＝4x＝44的植株)；

5)所得四倍體植株按常規技術種植，得到四倍體千斤拔。

上述方法的步驟1)中，可以按現有常規技術將二倍體千斤拔的種子培養成種子苗，這里不再詳述。

上述方法的步驟2)中，所述的分化培養基配方為：MS+6-BA 0.5～1.0mg/L+NAA 0.05～0.2mg/L+蔗糖2～5％+瓊脂0.4～0.5％，更優選的分化培養基配方為：MS+6-BA 0.53mg/L+NAA 0.12mg/L+蔗糖3％+瓊脂0.5％。在分化培養基中進行光照培養的培養條件與現有技術相同，優選為：溫度為20～28℃，光照時間為10～12h/d，光照強度為1000～2000lx。該步驟中，所述暗培養的操作及培養條件與現有技術相同。

上述方法的步驟2)中，在用液體法誘導種子苗產生染色體基因組倍數性變化時的操作溫度與現有技術相同，通常是在18～25℃條件下進行。

上述方法的步驟3)中，所述的生根培養基配方為：1/2MS+6-BA 0.01～0.1mg/L+NAA 0.4～1.0mg/L+蔗糖2～5％+瓊脂0.4～0.5％+活性炭0.2～0.5％，優選的生根培養基配方為：1/2MS+6-BA 0.05mg/L+NAA 0.45mg/L+蔗糖2％+瓊脂0.5％+活性炭0.5％。在生根培養基中的培養條件與現有技術相同，優選為：所述光照培養的條件為：溫度為20～28℃，光照時間為10～12h/d，光照強度為1000～2000lx。

上述方法的步驟4)中，為了減少染色體數目檢測的工作量，可以將步驟3)獲得的根莖葉完整的植株與常規二倍體植株對照，以葉片大小、顏色，莖干作為指標，篩選出有明顯變化的植株作為染色體倍數性加倍的候選植株，再檢測這些候選植株的染色體數目，以篩選得到四倍體植株。對植株進行染色體數目檢測的方法與現有技術相同，具體可以是：剪取目標株幼嫩根尖或莖尖0.5cm，用卡諾固定液(無水乙醇：冰乙酸＝3：1)固定15min以上，流水下沖洗15min,解離液(濃鹽酸：甲醇＝1：1)解離2～30min，清水沖洗15min，切取根尖、莖尖0.1mm，用卡寶品紅染色液染色，壓片觀察統計根尖或莖尖染色體。

本發明還包括由上述方法培育得到的四倍體千斤拔。