[發明專利]平臥菊三七中綠原酸類成分的分離和含量測定方法

有效

• 申請號: 201510388257.3
• 申請日: 2015-07-03
• 公開（公告）號: CN104931620B
• 公開（公告）日: 2017-03-08
• 發明（設計）人: 李小軍;唐和斌;張妹砣;李婷婷;楊艷羚;穆云妹;李玉桑
• 申請（專利權）人: 唐和斌
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所42001
• 代理人: 余曉雪

技術領域

本發明涉及中草藥質量控制領域，具體涉及平臥菊三七浸膏的質量檢測方法，更具體地，涉及平臥菊三七浸膏中綠原酸、新綠原酸和三種異綠原酸的定量測定方法。

背景技術

平臥菊三七(Gynura?procumbens(Lour.)Merr)俗稱帕崩板，為菊科菊三七屬多年生草本植物，藥食兼用，具有廣泛的藥理作用，《傣醫藥》記載帕崩板“散瘀、消腫、活血生肌”，在我國周邊的東南亞民族地區，它還用于降糖降脂、抗肝癌、解臟毒和保護腸道。民間常將嫩莖葉作蔬菜食、作茶飲，作為新食品原料(原衛生部公告2012年第8號)，其在廣東、江西等地有規模化的種植。已知成分包括綠原酸(朱玉婷廖為明，鄭國棟，張清峰.平臥菊三七中綠原酸提取及純化工藝的優化.湖北農業科學.2012,51(19).)、咖啡酸、黃酮、生物堿、萜烯、香豆素類等。現有文獻報道了其中綠原酸的提取及純化工藝，對于平臥菊三七中其他綠原酸類似成分的研究尚未有涉及，且目前未見其質量標準的相關報道，因此，申請人分離制備各成分，同時建立HPLC法測定各成分含量。

利用傳統外標法測定多指標需要對照品的種類多、數量大、價格昂貴，有文獻提出一測多評的多指標的質控模式(何兵，劉艷，楊世艷，張燕.HPLC一測多評法同時測定雙青咽喉片中10種成分.中草藥，2013，08(44):974-981.)，以廉價易得的對照品為內標，以該成分與其他成分的相對校正因子(f_k/s)，來計算其他成分的量。本實驗以綠原酸為參照物，建立其與其他成分之間的f_k/s，并計算各成分的含量，與采用外標法的結果進行對比，來驗證一測多評的準確性和可靠性。這為更真實評價平臥菊三七質量提供了全新模式。

發明內容

針對現有技術中存在的不足，本發明的目的首先在于提供了一種分離制備平臥菊三七中綠原酸、新綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B和異綠原酸C的HPLC方法；

基于上述HPLC方法，本發明進一步提供了兩種平臥菊三七中綠原酸、新綠原酸和三種異綠原酸的定量測定方法。

為了實現上述目的，本發明采用了以下技術措施：

本發明用制備型高效液相色譜法分離平臥菊三七中單體成分，利用液質聯用、核磁共振法鑒定其結構。建立能準確測定其成分含量的HPLC方法，從平臥菊三七中分離純化綠原酸、新綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B和異綠原酸C，其中異綠原酸A、B和C首次從本屬植物中分離。在此基礎上，以綠原酸為對照，計算相對校正因子，建立“一測多評”法，相對校正因子的耐用性良好，一測多評法與外標法對比結果無顯著差異。所建立的含量測定方法可用于同時測定平臥菊三七提取物中5種綠原酸類成分。

在制備體系中，申請人對比了乙腈-水和乙腈-0.1v/v％三氟乙酸水溶液系統，結果采用乙腈-0.1v/v％三氟乙酸水溶液洗脫系統在高濃度進樣情況下，洗脫分離效果最好，理論塔板數最高，節省了成本；在分析體系中，乙腈-0.1v/v％三氟乙酸水溶液洗脫體系未能使異綠原酸A、異綠原酸B與異綠原酸C之間有效分離，而使用乙腈-0.1w/v％(w/v的單位是g/mL)磷酸水溶液洗脫體系使得各單體分離度高。同時比較了超純水、98v/v％甲醇、50v/v％甲醇三種提取溶媒，結果50v/v％的甲醇效果更優。

單獨測定藥材中成分含量耗時、耗力、效率低下、成本高，已不能滿足中藥材質量研究的需求，同時測定多種成分含量的方法成為質量控制的有效方法之一，本發明所建立的條件為綠原酸類極其相似的成分的分離提供了參考。

隨著平臥菊三七的應用逐步增多，僅控制其中綠原酸的含量顯然不能真實地評價藥物的內在質量，而采用一測多評法，在一定線性范圍內，成分的量與檢測器響應成正比，通過使用一種常見對照品同時測定其他四種成分的含量，能全面而真實地評價平臥菊三七的質量。

附圖說明

圖1為實施例1中步驟1.3所得到的HPLC圖譜，其中，1為新綠原酸；2為綠原酸；3為異綠原酸B；4為異綠原酸A；5為異綠原酸C。

圖2為實施例2中的混合對照品(A)及樣品(B)的HPLC色譜圖。

具體實施方式

下面申請人將結合具體的實施例對本發明方法進行詳細說明。

實施例1?平臥菊三七中綠原酸類成分的分離鑒定

1平臥菊三七浸膏樣品的制備