[發(fā)明專利]洋桔梗花粉超低溫保存方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510380584.4
• 申請(qǐng)日: 2015-07-02
• 公開（公告）號(hào): CN105028391B
• 公開（公告）日: 2017-12-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 和鳳美;朱永平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): A01N3/00
• 分類號(hào): A01N3/00
• 代理公司: 昆明正原專利商標(biāo)代理有限公司53100
• 代理人: 金耀生

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種植物花粉保存方法，具體是一種洋桔梗花粉超低溫保存方法。

背景技術(shù)

洋桔梗（Eustoma grandiflorum）為龍膽科（Gentianaceae）草原龍膽屬（Eustoma russellianum）1～2年生草本植物，因其花色豐富、姿態(tài)優(yōu)美，被廣泛用于鮮切花、園林布景等。洋桔梗是雌雄同花植物，雄蕊比雌蕊早成熟3～5天，在自然環(huán)境下屬于異花授粉植物?；ǚ凼欠N子植物的雄配子體，在有性繁殖中發(fā)揮著重要作用，對(duì)花粉進(jìn)行貯藏保存是種質(zhì)保存、雜交育種及商業(yè)制種的重要手段之一。

目前，洋桔梗育種主要方式是優(yōu)勢(shì)育種，花粉的提前采收和貯藏是必須的。洋桔梗自交系間雜交存在超強(qiáng)雜種優(yōu)勢(shì)，在制種過(guò)程中往往需要人工授粉來(lái)滿足制種要求，而具有較高生命力的花粉是確保雜交成功的首要條件，所以，自交系花粉保存成為人工授粉最重要的前提，洋桔梗的花粉壽命很短，離開植株后自然條件下存活時(shí)間不長(zhǎng)，這給種質(zhì)保存和雜交育種工作帶來(lái)極大的不利?；ǚ鄣拈L(zhǎng)期保存技術(shù)能夠克服在種子生產(chǎn)上和雜交育種工作中存在的時(shí)間和空間限制，還可以節(jié)省人力、物力，防止花粉過(guò)?；蛉鄙?，親本易丟失等一系列問(wèn)題?；ㄆ诓挥鍪茄蠼酃ｋs交過(guò)程中經(jīng)常遇到的問(wèn)題之一，只有適宜的花粉貯藏條件保存花粉的活力是解決該問(wèn)題的關(guān)鍵。

超低溫技術(shù)是進(jìn)行種質(zhì)資源保存的一條新途徑，是目前唯一可行的長(zhǎng)期而穩(wěn)定地保存種質(zhì)資源的方法。將超低溫保存技術(shù)應(yīng)用于花粉保存，其優(yōu)點(diǎn)：（1）操作簡(jiǎn)單易行、占用空間小、安全穩(wěn)定；（2）保存成本低；（3）可以大大延長(zhǎng)花粉的保存時(shí)間，使花粉的貯運(yùn)和交換成為可能，同時(shí)還能很好服務(wù)于育種工作，提高育種效率；（4）經(jīng)過(guò)低溫保存的花粉能保持其遺傳完整性和穩(wěn)定性；（5）低溫條件下還可以避免病蟲害的引入，為地區(qū)間、國(guó)際間的種質(zhì)交換提供方便。

目前，為滿足種質(zhì)資源保存和交換以及雜交育種工作的需求,花粉超低溫保存研究日漸興起并逐步深入,保存材料從農(nóng)作物、果樹逐漸擴(kuò)展到藥用植物、園林植物等各類植物花粉。但不同的植物花粉其超低溫保存所采用的方法以及保存參數(shù)是不一樣的，例如：在花粉超低溫保存中，預(yù)冷凍的效果因植物種類不同而有較大差異,預(yù)冷凍對(duì)桃、梨,人參以及牡丹的花粉超低溫保存的效果沒有顯著影響；刺葵花粉經(jīng)預(yù)冷凍處理后比直接投入液氮的花粉生活力有所降低；番茄花粉經(jīng)-25℃預(yù)冷凍能夠顯著提高超低溫保存后花粉的萌發(fā)率，因此，對(duì)花粉預(yù)冷凍的處理完全不能一概而論。再者,超低溫保存后化凍處理也因不同種類植物有所不同,例如：番茄花粉用自來(lái)水沖洗較理想；茄屬花粉超低溫保存后在50℃水浴中化凍10s效果最好；牡丹花粉在30℃溫水浴化凍花粉有較高的萌發(fā)率；梅花花粉在室溫化凍效果較差，用自來(lái)水沖洗及溫水浴化凍效果最好,但二者間差異不明顯。

因此，研發(fā)一種適合于洋桔?；ǚ鄣目尚械馁A藏保存的方法是非常必要的。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有洋桔?；ǚ墼谧匀粭l件下保存存在壽命短的問(wèn)題，本發(fā)明提供一種洋桔?；ǚ鄢蜏乇４娣椒?。

本發(fā)明通過(guò)下列技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種洋桔?；ǚ鄢蜏乇４娣椒?，經(jīng)過(guò)下列各步驟：

（1）花粉采集及干燥：選取發(fā)育正常、無(wú)病蟲危害的洋桔梗健壯植株，開花后收集花粉，并進(jìn)行干燥；

（2）凍存方法：將步驟（1）的花粉放入凍存管中并置于2～6℃下冷藏2～5小時(shí)后，轉(zhuǎn)入-15～-25℃冷凍3～6小時(shí)后，再投入液氮中保存一周，然后再置于-75～-85℃下長(zhǎng)期保存，即完成對(duì)洋桔?；ǚ鄣某蜏乇４?。

所述步驟（1）的收集花粉是在開花后1～2天采集洋桔?；?，取出花藥，將花藥均勻地散在蠟光紙上，置于室溫下，用600瓦白熾燈在距離1米遠(yuǎn)處光照，待花藥散粉后，用120目篩子過(guò)篩去雜，將過(guò)篩后的花粉用硫酸紙包好。

所述步驟（1）的干燥是按干燥劑與花粉質(zhì)量比為250～350:1，將花粉與干燥劑一起置于室溫下進(jìn)行干燥2～5小時(shí)，使花粉含水量為4～7%。

所述干燥劑為變色硅膠。

所述步驟（2）所得洋桔梗花粉在使用時(shí)，置于室溫下自然解凍后，再按常規(guī)方法直接用于授粉。