[發明專利]含雙油體蛋白與重組成纖維生長因子9融合蛋白的油體

在審

• 申請號: 201510376066.5
• 申請日: 2015-07-01
• 公開（公告）號: CN105039390A
• 公開（公告）日: 2015-11-11
• 發明（設計）人: 姜潮;李校堃;李海燕;楊晶;易善勇;田海山;官麗莉;郭詠昕;黃建;王艷芳;杜林娜
• 申請（專利權）人: 吉林農大生物反應器工程有限公司;吉林農業大學
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/66;C12N15/12;C12N15/29;C11B1/00;A61K8/97;A61K8/64;A61Q19/00;A61Q5/12;A61K38/18;A61P17/00
• 代理公司: 長春市東師專利事務所 22202
• 代理人: 張鐵生

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，具體涉及含雙油體蛋白與重組成纖維生長因子9融合蛋白的油體。

背景技術

成纖維細胞生長因子9(fibroblastgrowthfactor9，FGF9)是成纖維細胞生長因子家族(FGFs)的成員之一。廣泛分布于人體各種組織中，它參與骨骼發育、血管形成、胚胎發育、損傷修復、細胞凋亡、神經再生、腫瘤生長等多種生理和病理的過程，可有效促進有絲分裂和細胞生長。FGF9最初發現于人類神經膠質瘤細胞系，具有神經膠原激活因子的活性，基于其活性最初被命名為膠質細胞激活因子(glia-activatingfactor，GAF)。FGF9是一種自分泌或旁分泌生長因子，在許多生理過程起著至關重要的作用，包括胚胎發育。人FGF9基因編碼一個由207個氨基酸組成的蛋白質序列，分子質量約26kDa。FGF9主要分布于細胞和組織中，包括成骨細胞、軟骨細胞、血管內皮細胞、晶狀體上皮細胞，皮膚、肝、腎臟、胃、生殖系統、淋巴組織等。研究發現，FGF9具有多種生物學活性，作為胞間信號分子它參了血管形成、胚胎發育、損傷修復、細胞凋亡、神經再生、腫瘤生長等多項生理和病理的過程，尤其是在卵巢癌發生、骨骼發育、神經再生、性腺分化等過程中起著重要的作用。因此，臨床上應用FGF9對診斷卵巢癌、治療軟骨障礙、軟骨發育不全以及性腺分化機理的研究，越來越受到人們的關注，同時如何進行高純度、高產率的具有生物活性的FGF9的提取一直是廣大研究者關注的課題。

人FGF9定位于第13號染色體短臂上(13qll-q12)，編碼區含有627個脫氧核苷酸，共編碼208個氨基酸；在FGF9的3′端非編碼區(3′-UTR)存在一個潛在的多腺苷酸化位點；FGF9的5′端非編碼區(5′-UTR)和外顯子1具有一個高G/C區域，具有哺乳動物啟動子的普遍特點。FGF9的空間構象是由C端和N端的2個α螺旋和12個β折疊組成的一個類似金字塔形的結構。在結構上，FGF9和FGF16、FGF20相似，為同一亞家族成員，FGF9與FGF家族FGF1、FGF2具有30%的同源性，并且氨基酸保守區完全相同，具有三葉草核心結構。FGF9與FGF16、FGF20均沒有經典的信號肽序列，但其能依靠N端的35個氨基酸作為非剪切信號肽以及位于96～101位的EFISIA基序所具有的疏水性分泌到細胞外。

FGF9是一種肝素結合生長因子，為單鏈多肽，具有多種生物學活性，其活性依賴于肝素的存在。FGFR主要有4種(FGFR1～FGFR4)，均為單鏈酪氨酸激酶受體，結構十分相似，由胞外區、跨膜區、胞內區組成。FGF9主要與FGFR2和FGFR3結合，FGFR的結合需要肝素、受體和配體間形成三分子復合體。

FGF9及其受體在骨骼發育過程中起重要作用。在骨骼發育早期，FGF9能促進軟骨細胞肥大；在骨骼發育后期，其主要調節生長板的血管化和成骨過程。在牙齒發育過程中FGF9與FGF4在調節牙尖的形成信號中心原發性釉結節中的表達水平上調，繼而在繼發性釉結節上表達，且FGF9的表達從原發性釉結節擴延到內釉上皮處。在連續不斷切牙的生長過程中，FGF9表達于牙頸環上皮處。從而認為作為上皮信號分子FGF9在牙齒發育各階段中間接地誘導牙上皮與間充質之間相互作用，在牙齒形態調節中起作用，甚至其可能參與到成牙本質細胞分化過程。FGF9廣泛存在于中樞神經及外周神經系統中，對許多腦神經元有維持生存和促進生長及修復受損神經元并再生的作用，能顯著的延緩神經元死亡^[12]和保護神經細胞的作用并防止脊根神經節神經的壞死，在小腦顆粒神經元的遷移中也起到關鍵作用。此外，FGF9還具有促進組織修復、調節視力、調節性腺分化、促進毛發再生、控制盲腸的形成以及卵巢癌腫瘤發生等多種生物活性。

FGF9結構和功能特點的多樣性和復雜性，決定了其在許多領域的重要地位以及良好的應用前景，其適應癥機制的研究主要有以下幾方面：

（一）FGF9誘發卵巢癌的機制研究

FGF9具有癌基因活性，研究發現其與肺癌、肝癌、前列腺癌、大腸癌以及子宮內膜癌的發生發展有著重要的關系。增殖細胞、促進上皮細胞惡性轉化和浸潤內皮細胞都與FGF9的參與相關，在卵巢癌發生發展過程中起到了關鍵作用。

（二）FGF9對骨骼發育的作用機制