[發(fā)明專利]一種牡丹皮提取物及其在制備防治肺纖維化藥物中的用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510375625.0
• 申請日: 2015-06-29
• 公開（公告）號: CN104983816B
• 公開（公告）日: 2018-03-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李建生;余海濱;沈俊嶺;任周新;李俊凱
• 申請（專利權(quán)）人: 河南中醫(yī)學院
• 主分類號: A61K36/71
• 分類號: A61K36/71;A61P11/00
• 代理公司: 鄭州大通專利商標代理有限公司41111
• 代理人: 李秋紅

一、技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種牡丹皮提取物及其在制備防治肺纖維化藥物中的用途。

二、背景技術(shù)：

肺纖維化是一種嚴重威脅人類健康和生命的惡性疾病。肺纖維化確診后平均存活時間為3年，或出現(xiàn)臨床癥狀后，存活5年。在肺纖維化的終末階段，肺移植是唯一有效的治療方法，但是供體的缺乏、昂貴的醫(yī)療費用等限制了肺移植的應用，提高藥物的療效一直是廣大醫(yī)藥工作者追求的目標。隨著對肺纖維化發(fā)病學研究的日益深入，已經(jīng)證實細胞外基質(zhì)(ECM)中膠原蛋白、彈性纖維以及蛋白糖類的過量堆積是其特征性的病理組織學變化。目前，認為成纖維細胞的增殖和活化是ECM大量形成和堆積的主要原因，肺泡上皮細胞的間質(zhì)轉(zhuǎn)化、成纖維細胞的增生是成纖維細胞的主要來源。在有害刺激、細胞因子等的作用下，成纖維細胞活化，分泌大量的ECM。盡管對肺纖維化的發(fā)病機制有了更深入的認識，但臨床治療仍然不佳。

目前，治療肺纖維化的藥物主要有糖皮質(zhì)激素類、免疫抑制劑和細胞毒類藥物。盡管少部分接受糖皮質(zhì)激素治療的患者顯示出一定的療效，但沒有完全或持續(xù)緩解者，副作用嚴重、長期療效不能確定等問題制約了這些藥物的長期應用。中藥能夠在一定程度上改善肺纖維化終末期患者的生活質(zhì)量，但也存在藥理作用機制和作用靶點不明確問題，阻礙了其在臨床的選擇應用。因此，阻斷成纖維細胞增殖、活化，抑制膠原等ECM，作用機制和靶點明確的藥物開發(fā)，具有重要的意義。

牡丹皮是毛茛科牡丹(Paeonia suffruticosa Andr.)根皮，是常用的一種中藥材之一。牡丹皮苦、辛，微寒。入歸心、肝和腎經(jīng)。具有清熱涼血，活血化瘀的功效。臨床用于治療溫毒發(fā)斑、吐血妞血、癰腫瘡瘍、經(jīng)閉痛經(jīng)、跌撲損傷等癥。牡丹皮及其提取物的藥理作用復雜，具有抗心肌缺血、抗血栓形成、降血壓、抗動脈粥樣硬化、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、改善肝損傷等藥理作用。在牡丹皮及其提取物、有效成分對肺的藥理學研究中，目前發(fā)現(xiàn)丹皮酚誘導某些肺腫瘤細胞的凋亡。在牡丹皮有關(guān)的纖維化的研究中，目前發(fā)現(xiàn)丹皮酚抑制腎小球系膜細胞合成與分泌纖維連接蛋白(FN)和膠原蛋白；抑制腹膜成纖維細胞的增殖。但是，截至目前，尚無牡丹皮提取物、有效部位和有效成分防治肺纖維化的相關(guān)研究報道。

三、發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：提供一種牡丹皮提取物及其在制備防治肺纖維化藥物中的用途。實驗表明，牡丹皮提取物能夠有效抑制肺泡上皮細胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化和肺成纖維細胞活化，從而抑制肺纖維化的形成和發(fā)展，使其在制備防治肺纖維化藥物中得到新的用途。

為了解決上述問題，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：

本發(fā)明提供一種牡丹皮提取物，所述牡丹皮提取物是通過以下方法提取而得：

a、以牡丹皮為原材料，加入占牡丹皮原材料重量6～20倍的果膠酶水溶液，然后置于閃式提取器中，在室溫條件下提取0.5～5min；提取后的藥材及溶液中加入酸調(diào)節(jié)所得提取溶液的pH值至3.8～5.7，調(diào)節(jié)后水浴加熱至37～60℃進行酶解，酶解1～5小時，得到酶解液；

b、采取水蒸氣蒸餾法收集占酶解液總重量1/4～1/2的蒸餾液，所得蒸餾液在2～4℃條件下冷藏放置24小時，在此條件下進行過濾，所得結(jié)晶體為丹皮酚；

c、步驟b蒸餾后所剩提取液及藥渣進行過濾，過濾后所得藥渣待用，所得濾液在50℃條件下減壓濃縮至比重為1.1～1.2的浸膏，然后采用sevage法脫蛋白，脫除蛋白后加入乙醇使浸膏含醇量體積百分比達到75～85％，靜置12h；靜置后過濾除去上部乙醇溶液，所得乙醇溶液待用；除去乙醇溶液后得到底部沉淀物，采用無水乙醇洗滌所得沉淀物，除去其中的水分，再用丙酮洗滌除去沉淀物中的無水乙醇，最后用無水乙醚洗滌除去沉淀物中的丙酮，然后在30～50℃下減壓干燥，得到牡丹皮多糖；

d、將步驟c所剩待用藥渣加入待用的乙醇溶液中，在40～60℃條件下浸泡0.5～2小時，然后過濾，所得濾液在50℃條件下減壓濃縮至比重為1.1～1.2的浸膏，所得浸膏過大孔吸附樹脂柱進行純化，得到牡丹皮總苷；

e、將步驟b所得丹皮酚、步驟c所得牡丹皮多糖和步驟d所得牡丹皮總苷混合，得到牡丹皮提取物。

根據(jù)上述的牡丹皮提取物，所述果膠酶水溶液的制備方法為：稱取果膠酶，加入果膠酶重量8～25倍的蒸餾水進行充分溶解，然后加入飲用水至果膠酶質(zhì)量百分濃度為0.5～2.5％，得到果膠酶水溶液。

根據(jù)上述的牡丹皮提取物，步驟a中所述加入酸調(diào)節(jié)所得提取溶液的pH值至3.8～5.7，其中所述酸為鹽酸、硫酸和醋酸中的至少一種。