[發明專利]一種基于含糖聚合物的pH探針的制備方法

有效

• 申請號: 201510375268.8
• 申請日: 2015-06-30
• 公開（公告）號: CN105017477B
• 公開（公告）日: 2017-04-19
• 發明（設計）人: 陳高健;李志運;陸偉
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: C08F220/58
• 分類號: C08F220/58;C08F220/30;C08F8/34;G01N21/64;C09K11/06
• 代理公司: 蘇州市新蘇專利事務所有限公司32221
• 代理人: 楊曉東,朱亦倩

技術領域

本發明涉及化學技術領域，特別涉及一種基于含糖聚合物的pH探針的制備方法。

背景技術

細胞內pH調控著很多組織器官的功能，同時對細胞的代謝過程起著重要的作用，例如細胞的增殖和凋亡。跟蹤監測活體細胞的pH的變化對于研究細胞內化路徑是非常重要的。同時，隨著聚合方式的不斷發展，自由基聚合由于具有聚合條件溫和、分子量可控、單體適用范圍廣等特點而被廣泛運用在制備無規、均聚物、嵌段含糖聚合物中。Sharpless等人提出的Click Reaction也為聚合提供一條新的道路，點擊反應具有條件簡單、高效、無副反應、易純化等特點，被廣泛應用在制備醫用材料等領域。

發明內容

本部分的目的在于概述本發明的實施例的一些方面以及簡要介紹一些較佳實施例。在本部分以及本申請的說明書摘要和發明名稱中可能會做些簡化或省略以避免使本部分、說明書摘要和發明名稱的目的模糊，而這種簡化或省略不能用于限制本發明的范圍。

鑒于上述和/或現有基于含糖聚合物的pH探針的制備方法中存在的問題，提出了本發明。

因此，本發明的目的是提供一種基于含糖聚合物的pH探針的制備方法，其利用活性自由基聚合的方法得到帶有熒光素的含糖無規共聚物，能夠調控聚合物分子量的大小和糖的含量，再通過click點擊反應將丙烯酰氧乙基硫代羅丹明B接到聚合物鏈末端，具有很好的水溶性，強的熒光性，利用該聚合物良好生物相容性和PH響應性，細胞吞噬后，對細胞內的PH具有指示作用。

為解決上述技術問題，本發明提供了如下技術方案：一種基于含糖聚合物的pH探針的制備方法，其得到帶有熒光素的含糖無規共聚物，調控聚合物分子量的大小和糖的含量，再將丙烯酰氧乙基硫代羅丹明B接到聚合物鏈的端基處，其基本結構式如下：

其中，m、n根據含糖單體和熒光素O-丙烯酸甲酯單體的比例而定，m為50-400，n為1-50。

作為本發明所述基于含糖聚合物的pH探針的制備方法的一種優選方案，其中：所述得到帶有熒光素的含糖無規共聚物，是將2-(甲基丙烯酰胺基)葡萄糖、熒光素O-丙烯酸甲酯和一定量的RAFT試劑和引發劑，溶于溶劑中，在70℃無氧的條件下反應24h，冷卻后在甲醇中聚沉，得到黃色沉淀，透析，冷凍干燥。

作為本發明所述基于含糖聚合物的pH探針的制備方法的一種優選方案，其中：所述溶劑DMF和/或DMAc。

作為本發明所述基于含糖聚合物的pH探針的制備方法的一種優選方案，其中：所述含糖單體，其與對pH有響應性的熒光素單體發生共聚的比例為50-400：1-50。

作為本發明所述基于含糖聚合物的pH探針的制備方法的一種優選方案，其中：所述RAFT試劑和引發劑的比例為1:0.25，RAFT為CPDN或其他硫代酯類RAFT鏈轉移劑。

作為本發明所述基于含糖聚合物的pH探針的制備方法的一種優選方案，其中：所述將丙烯酰氧乙基硫代羅丹明B接到聚合物鏈的端基處，利用一級胺以及三乙胺的還原性和催化性將聚合物末端的雙硫鍵還原為巰基，再與丙烯酰氧乙基硫代羅丹明B上的雙鍵發生點擊反應，將丙烯酰氧乙基硫代羅丹明B接到聚合物鏈上。

作為本發明所述基于含糖聚合物的pH探針的制備方法的一種優選方案，其中：將熒光素O-丙烯酸甲酯與2-(甲基丙烯酰胺)葡萄糖共聚的聚合物和丙烯酰氧乙基硫代羅丹明B溶解到干燥的DMF中，通30min氬氣，再加入三乙胺和正己胺，在無氧條件下50℃反應24h，透析，冷凍干燥得到最終產物。

作為本發明所述基于含糖聚合物的pH探針的制備方法的一種優選方案，其中：所述熒光素O-丙烯酸甲酯和丙烯酰氧乙基硫代羅丹明B在不同波長的光的激發下所發射熒光的波長分別在520nm和625nm波段。

作為本發明所述基于含糖聚合物的pH探針的制備方法的一種優選方案，其中：所述含糖聚合物在水溶液中聚集體的平均粒徑為100nm。

本發明的有益效果：通過本發明方法制備得到的帶有對pH靈敏和不靈敏兩種熒光的含糖聚合物，具有很好的水溶性，在一定pH范圍內有響應性，對細胞內pH的大小有指示功能。

附圖說明

圖1為聚合物poly(MAG-FITC)-RBITC的凝膠滲透色譜法示意圖，分子量為11000左右；

圖2為含糖聚合物的紫外可見吸收光譜示意圖，其中，在510nm和570nm左右分別有一個明顯的吸收峰，說明含糖聚合物上面已經含有熒光素O-丙烯酸甲酯和丙烯酰氧乙基硫代羅丹明B這兩種物質；