[發明專利]一種接種大量液體標本的固體培養基及培養方法

在審

• 申請號: 201510370064.5
• 申請日: 2015-06-29
• 公開（公告）號: CN104911243A
• 公開（公告）日: 2015-09-16
• 發明（設計）人: 唐明忠
• 申請（專利權）人: 匯征聯合（北京）醫療器械有限公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產權代理有限公司 11250
• 代理人: 李敏

技術領域

本發明涉及一種接種大量液體標本的固體培養基及培養方法，屬于微生物培養技術領域。

背景技術

微生物培養方法因培養基不同分為固體培養方法和液體培養方法；其中，常用的培養基為固體培養基和液體培養基。固體培養基為固體形態，微生物在培養基表面進行生長，廣泛用于微生物的分離、鑒定、保藏、計數及菌落特征的觀察等。液體培養基因營養物質分布均勻，與微生物表面接觸充分，能大量溶解微生物的代謝產物，還可以接種大量的標本，培養的微生物陽性率高；但是液體培養基不易定量和分離細菌，所以液體培養基廣泛用于微生物的生理、代謝研究以及大規模的生產。

固體培養和液體培養各有優缺點，在實際應用中根據不同的需要進行選擇或相互補充，配合使用。在微生物實驗室的工作中會有大量液體標本微生物檢測，如醫學上的臨床血液細菌檢測或鑒定、生活或環境中食品、藥品、水和物體表面的細菌檢測。在進行大量液體標本微生物檢測時，首先需要在液體培養基中進行培養使細菌增殖，之后再將增殖后的細菌接種到固體培養基上，最后在固體培養基上進行分離、鑒定和觀察。通過上述方法，有效地利用了液體培養基在液體環境中營養物質分配均勻、促使微生物快速增殖、陽性率高的優點，但是因為液體培養基不易于進行分離、鑒定和觀察，所以不得不接種到固體培養基上進一步進行后續的檢測，最終導致上述接種的方法比較復雜，培養時間較長。

但是在實際應用中，如果直接將大量液體標本接種到現有的瓊脂培養基上，雖然標準的瓊脂固體培養基也能吸收少量液體，但由于瓊脂固體培養基已經大量吸水膨脹，再吸收液體的能力很小，通常小于起始凝膠體積的5％，瓊脂培養基中會存在大量的液體，微生物在大量的液體中不易于和固體培養基表面接觸，不能很好地利用固體培養基上的營養物質，從而影響了微生物的生長、增殖和分離，最終導致檢測結果的精確度降低。

發明內容

為此，本發明解決了現有技術中大量液體標本先進行液體培養再進行固體培養的方法中整個過程時間較長、操作較繁瑣、時效性差的問題，進而提供了一種可適用于大量液體標本直接培養、便于分離、計數和觀察、時效性強、操作簡單的固體培養基及培養方法。

為了達到上述目的，本發明的技術方案為：

一種固體培養基，具有培養層，所述培養層至少包含液體標本吸附層；所述液體標本吸附層為吸水膜層、和/或吸水粉層。

上述固體培養基中，在所述液體標本吸附層的表面或者底面設置有瓊脂培養基層。

上述固體培養基中，所述瓊脂培養基為營養性培養基、選擇性培養基或鑒定性瓊脂培養基。

上述固體培養基中，所述液體標本吸附層厚度為1-4mm。

上述固體培養基中，所述吸水膜層或吸水粉層包含高吸水性材料。

上述固體培養基中，所述高吸水性材料為魔芋膠、明膠、黃原膠、瓜豆膠、瓊脂、瓊脂糖、殼多糖、角叉菜膠、聚丙烯酸鹽、聚乙烯酸鹽、膨潤土、藻酸鹽、膠原蛋白、熔融的硅酸鹽、水溶性淀粉、改性纖維素、聚乙二醇、聚氧乙烯、聚乙烯醇、葡聚糖、聚丙烯酰胺中的一種或幾種。

上述固體培養基中，所述吸水層還含有微生物生長所需營養物質、微生物生長調節劑、溶血劑、裂解劑、抗生素中和劑、細菌選擇生長劑中的一種或幾種。

其中，所述溶血劑或裂解劑使標本中血細胞或其它人體組織物質溶解或裂解，便于水分的吸收。常用的溶血劑為：皂素、毛地黃皂苷、吐溫、月桂酸單甘酯或其他表面活性劑；裂解劑可為蛋白酶。

微生物生長調節劑可以為細菌的各種生長因子，例如：胰蛋白胨、大豆胨、蛋白胨、麥芽提取物、葡萄糖、氯化血紅素、胱氨酸、二硫化物、甲萘醌、輔酶I。

抗生素中和劑可以祛除標本中抗生素對細菌培養的影響，提高和/或加快測試樣品中微生物的培養。例如：各種樹脂、樹膠、碳基材料(如活性炭)、抗生素降解酶(如β-內酰胺酶)。

細菌選擇生長劑，在進行選擇培養時選擇加入：如大腸桿菌可加入乳糖、膽鹽、K₂HPO₄、MgSO₄、硫酸鎂、二硫化物、SDS；真菌和其他耐酸微生物，可加入：葡萄糖、酵母提取物、NHSiCl₄，檸檬酸或酒石酸。

上述固體培養基中，還含有微孔膜層，微孔膜層位于所述固體培養基的最上層，所述微孔膜層為纖維素膜、再生纖維素膜、超細玻璃纖維濾膜、聚氯乙烯膜或聚四氟乙烯膜。

一種大量液體標本微生物的培養方法，其包括以下步驟：

(1)用高吸水性材料制備吸水膜層、吸水粉層或吸水膜層和吸水粉層的結合層，然后得到液體標本吸附層；