[發(fā)明專利]豬偽狂犬病毒gG的ELISA檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510369986.4
• 申請日: 2015-06-29
• 公開（公告）號: CN105044350B
• 公開（公告）日: 2017-08-08
• 發(fā)明（設計）人: 黃書林;潘文;喬磊;李潔;蘇小齊
• 申請（專利權）人: 中牧實業(yè)股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權代理有限公司11002
• 代理人: 王文君

1.一種豬偽狂犬病毒gG的ELISA檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含包被有豬偽狂犬病毒gG蛋白重組抗原的酶標板；

所述gG蛋白重組抗原的制備方法如下：以豬偽狂犬病毒中國流行株的gG蛋白編碼基因為模板，利用引物對擴增得到gG蛋白基因片段，構建重組表達載體，將所述重組表達載體轉(zhuǎn)化入大腸桿菌Rosetta(DE3)中，加IPTG進行誘導表達；將表達產(chǎn)物通過His-Tag鎳柱親和層析法純化后，獲得純化的gG蛋白重組抗原；

所述引物對包括：

上游引物：ATGAATTCAGAGAGGCCCCTCGGGA；

下游引物：TAAAGCTTGGCCGCGGGCGAGCCCAC；

所述包被有豬偽狂犬病毒gG蛋白重組抗原的酶標板的制備方法包括如下步驟：

1)用0.05M pH9.6的碳酸鈉緩沖液稀釋gG蛋白重組抗原，加入酶標板孔中，包被量為0.1-1ug/孔；

2)將酶標板用封板膜覆蓋，置于37℃下30分鐘，然后轉(zhuǎn)至4℃孵育不低于12h；

3)棄去酶標板孔內(nèi)液體，向板孔中加入洗滌液，靜置3分鐘，重復3～5次；每次洗滌時棄去孔內(nèi)液體，最后一次洗滌棄去洗滌液后，將殘留液體在吸水紙上拍干；

4)用含0.5-4％BSA、2％-8％新牛血清的0.01M pH7.4的磷酸鹽緩沖液封閉酶標板；

5)將酶標板置于37℃下1h，孵育后將孔內(nèi)液體棄去，在吸水紙上拍干；

6)向酶標板板孔加入含5％-20％蔗糖的0.01M pH7.4的磷酸鹽緩沖液室溫孵育3-5h，棄去孔內(nèi)液體，自然晾干后，用加入干燥劑的包裝袋抽真空密封保存。

2.根據(jù)權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含酶標抗體，所述酶標抗體為辣根過氧化物酶標記的山羊抗豬IgG。

3.根據(jù)權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括：樣品稀釋液、洗滌液、陰性對照血清、陽性對照血清、底物顯色液A、B和終止液。

4.根據(jù)權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述陽性對照血清為gG蛋白重組抗原免疫豬后，采集含有gG抗體的豬血清。

5.根據(jù)權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述樣品稀釋液和洗滌液中含有ProClin300作為防腐劑。