[發明專利]嗜水氣單胞菌外膜蛋白基因原核表達蛋白及其應用

在審

• 申請號: 201510367203.9
• 申請日: 2015-06-29
• 公開（公告）號: CN104961811A
• 公開（公告）日: 2015-10-07
• 發明（設計）人: 鄭宗林;黃朝芳;王廣軍
• 申請（專利權）人: 鄭宗林;黃朝芳
• 主分類號: C07K14/195
• 分類號: C07K14/195;C12N15/70;C12N15/31;A61K39/02;A61P31/04
• 代理公司: 北京國智京通知識產權代理有限公司 11501
• 代理人: 王昌貴

1.一種嗜水氣單胞菌外膜蛋白基因原核表達蛋白，其特征在于，所述蛋白將外膜蛋白基因片段克隆入原核表達載體pET-30a得到重組表達載體，將重組表達載體轉化大腸桿菌獲得重組大腸桿菌，將所述重組大腸桿菌接種于Amp抗性的LB平板培養至OD₆₀₀達0.6時，加入IPTG至終濃度為1.0mmol/L進行誘導表達，經純化后獲得嗜水氣單胞菌外膜蛋白基因原核表達蛋白，所述的嗜水氣單胞菌外膜蛋白基因原核表達蛋白氨基酸序列為SEQ?ID?NO.1，所述的嗜水氣單胞菌外膜蛋白基因核苷酸序列為SEQ?ID?NO.2。

2.一種權利要求1所述的嗜水氣單胞菌外膜蛋白基因原核表達蛋白的應用，其特征在于，所述的嗜水氣單胞菌外膜蛋白基因原核表達蛋白可作為抗原在制備預防嗜水氣單胞菌的疫苗制劑中使用。

3.根據權利要求2所述的一種嗜水氣單胞菌外膜蛋白基因原核表達蛋白的應用，其特征在于，所述預防嗜水氣單胞菌的疫苗制劑還包括弗式不完全佐劑。

4.根據權利要求3所述的一種嗜水氣單胞菌外膜蛋白基因原核表達蛋白的應用，其特征在于，所述弗式不完全佐劑與所述嗜水氣單胞菌外膜蛋白基因原核表達蛋白體積比為1:1。

5.根據權利要求4所述的一種嗜水氣單胞菌外膜蛋白基因原核表達蛋白的應用，其特征在于，所述的預防嗜水氣單胞菌的疫苗制劑的制備方法包括以下步驟：在無菌注射器中加入制備好的嗜水氣單胞菌外膜蛋白基因原核表達蛋白，用移液器向所述無菌注射器中加入等體積的弗式不完全佐劑，乳化5min后，用注射器反復推進，直至水相與油相完全融到一起乳化完全，形成油包水的乳白色液滴，即制成疫苗制劑。