[發明專利]一種鯽魚雌核發育魚苗的培育方法

有效

• 申請號: 201510366515.8
• 申請日: 2015-06-29
• 公開（公告）號: CN104904638B
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發明（設計）人: 童金茍;王新華;俞小牧;劉海洋;付北德;馮秀
• 申請（專利權）人: 中國科學院水生生物研究所
• 主分類號: A01K61/10
• 分類號: A01K61/10
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙)42222
• 代理人: 張火春

1.一種鯽魚雌核發育魚苗的培育方法，其特征在于：包含如下步驟：

(1)鯽魚倍性鑒定

利用4個微衛星標記，其座位名稱為HLJY018，HLJY029，HLJY049和YJ0004，對鯽魚群體進行染色體倍性鑒定，倍性判定方法為：基因分型結果在上述任何一個微衛星標記中出現過一次三個等位基因的鯽魚個體即認為是三倍體鯽魚，從未出現三個等位基因的個體則認為是二倍體鯽魚；排除具有三個等位基因的鯽魚個體，挑選性腺發育較好的二倍體野鯽的雌、雄個體，作為雌核發育誘導的親本群體；微衛星標記引物如下所示：

(2)精子遺傳物質失活

用預冷的Hanks液將來自1尾二倍體鯽魚的精液稀釋5-8倍，調整厚度至1-2mm，放置于冰盒上，然后放在紫外燈下17cm處照射18-22min，且紫外線照射劑量為30-40mW/cm²，溫度保持在0-4℃；照射過程中遮蔽自然光并置于搖床上進行，確保精子照射均勻，并用顯微鏡檢測精子活性；

(3)冷休克誘導減數分裂染色體加倍

取鯽魚卵子與步驟(2)中遺傳滅活的精子混均后，加入曝氣水啟動人工授精過程，2-3min后將受精卵置于5.5-6.5℃預冷的曝氣水中，冷休克處理20-25min，然后置于常溫下進行孵化；

(4)雌核發育魚苗的遺傳鑒定

利用微衛星標記對得到的雌核發育單倍體及雌核發育二倍體魚苗進行分子遺傳鑒定，從電泳圖譜中的每個個體的擴增條帶數目檢測并鑒定鯽魚雌核發育個體的染色體倍性；

(5)早期生長分析

將誘導得到的雌核發育二倍體鯽魚的魚苗置于孵化箱內進行養殖，30d后觀察全部存活個體的外觀表型特征并測量體重；

(6)減數分裂雌核發育魚苗的微衛星鑒定方法

利用10個父母本出現特異性的微衛星標記，其座位名稱為HLJY029、YJ0004、HLJY034、HLJY038、HLJY051、HLJY070、HLJY075、HLJY026、HLJY071、HLJY089，微衛星標記引物如下所示：

對誘導得到的雌核發育魚苗進行親子鑒定，確定其是否含有父本的遺傳物質，統計并分析雌核發育子代的純合度。