[發明專利]一種油菜素內酯的快速高效檢測方法

在審

• 申請號: 201510364250.8
• 申請日: 2015-06-25
• 公開（公告）號: CN105116060A
• 公開（公告）日: 2015-12-02
• 發明（設計）人: 吳月燕;劉蓉;饒慧云;楊國偉
• 申請（專利權）人: 浙江萬里學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 寧波市鄞州甬致專利代理事務所(普通合伙) 33228
• 代理人: 李迎春

1.一種油菜素內酯的快速高效檢測方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)以新鮮的葡萄果實為材料，用液氮快速研磨成粉末狀，以葡萄果實的重量為計算基準按4-5mL/g的量比加入80-95％甲醇作為浸提液，并同時加入同位素內標²H3油菜素內酯3-5ng/g和²H3油菜素甾酮3-5ng/g，低溫超聲提取30-60min，接著4℃冰箱靜置2-5h，然后過濾，取濾渣以葡萄果實的重量為計算基準按0.3-0.5mL/g的量比加80-95％甲醇浸提液，浸提1-2h，然后過濾，合并兩次過濾的濾液；

(2)除水：對步驟(1)得到的濾液進行物理吸附除水，得到上柱液；

(3)上柱液過C18柱，進行樣品吸附，使用40mmol/L的醋酸銨緩沖液作為洗脫液洗脫得到吸附液，吸附液過sephadexLH-20柱進行除雜，使用甲醇作為洗脫液得到洗脫產物后，再過silica柱，甲醇洗脫得到富集的樣品液；

(4)按0.5mg/mL的量比在樣品液中加入苯硼酸，于60-80℃水浴衍生反應20-40min，冷卻后經旋轉蒸發儀濃縮至干；

(5)使用乙腈進行復溶，得到濃度為0.5-5μg/mL的上樣液，供液相色譜測定；

(6)液相色譜測定：選用乙腈和水作為流動相，乙腈和水的體積比為(6︰4)～(9︰1)，選擇的激發波長為280nm、發射波長為700nm或激發波長為310nm、發射波長為375nm，選擇的檢測器為熒光檢測器，洗脫方式為等度洗脫，收集目的峰。