[發明專利]檢測轉基因大豆MON87708的引物、試劑盒和方法

在審

• 申請號: 201510362478.3
• 申請日: 2015-06-25
• 公開（公告）號: CN104894281A
• 公開（公告）日: 2015-09-09
• 發明（設計）人: 蔡先全;岳巧云;單振菊;李蓉;柏建山;邱德義;吳堅明;周思渝
• 申請（專利權）人: 蔡先全
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 中山市興華粵專利代理有限公司 44345
• 代理人: 吳劍鋒

技術領域

本發明設計一種檢測轉基因大豆MON87708及內源基因Lectin的雙重熒光PC檢測試劑盒，本發明還涉及一種采用上述試劑盒轉基因大豆MON87708及內源基因Lectin的方法。

背景技術

20世紀80年代，除草劑生產公司孟山都研究人員，從矮牽牛中克隆獲得抗性基因—EPSPS基因即膿桿菌的5一烯酮丙酮酸莽草酸一3一磷酸酶基因。應用Ti質粒介導轉移DNA即TV-DNA技術，將矮牽牛Ti質粒CaMv中35S啟動子控制的EPSPS基因導入大豆基因組中，進而育成抗除草劑草甘磷的轉基因大豆品種Roundup?Ready?Soybean，簡稱RR大豆。這種轉基因大豆于1994年獲得美國FDA批準，并較早地成為進行商業化大規模推廣生產的轉基因作物之一。

2012年全球轉基因作物的種植面積達1.703億公頃，與2011年的1.6億公頃相比，增長了6.4％。2012年全球種植轉基因作物的國家共有28個，總種植面積達1.7億公頃。美國、巴西、阿根廷、加拿大和印度是全球種植面積排名前五的國家，這五個國家的種植面積占據了全球總轉基因作物種植面積的將近90％。美國是全球轉基因作物種植面積最大的國家，棉花，玉米和大豆這三種作物的轉基因品種的總種植面積占三種作物總種植面積的90％左右。2001年世界種植大豆總面積7200萬公頃，而轉基因大豆有3330萬公頃占據全球轉基因作物的63％。2012年全球種植的大豆有81％為轉基因品種，且均為抗除草劑大豆。當然除此外，還有一些改良性狀的新品種大豆也相繼問世。營養學家則稱21世紀是“大豆的世紀”。由此可見，轉基因大豆在轉基因作物及未來食品中占有重要地位。

我國自1995年起，大豆由凈出口變為凈進口，而且進口量逐年增加。進口大豆主要來源于美國、加拿大、阿根廷和巴西等轉基因作物種植面積大國。我國種植的大豆是非轉基因品種，這是我國大豆及其加工產品在國際競爭中的優勢所在。非轉基因大豆走俏國際市場，其價格要高出轉基因大豆20％～30％。加強轉基因大豆的檢測，全面實行“標簽制度”，對發展我國大豆產業具有重要意義。由此，我們需要對食品及飼料中轉基因大豆的品系進行鑒定。

2015年4月30日，歐盟發布EU?NO?2015/700委員會實施條令，批準孟山都轉基因大豆MON87708用于食品。根據歐盟EC?NO?1829/2003號法規4(2)章節與16(2)章節的要求，批準以下產品：含有、包括或產自轉基因大豆MON87708的食品與食品配料；含有、包括或產自轉基因大豆MON87708的飼料；含有、包括轉基因大豆MON87708的其他產品，農業種植除外。為了加強對轉基因大豆特別是進口轉基因大豆的品系鑒定，根據歐盟轉基因品系準入相關文獻，迫切需要建立食品和飼料中轉基因大豆品系熒光PCR檢測方法。

針對Lectin基因和MON?87708基因，研究人員已開展了常規PCR和熒光PCR方法研究。目前，我國出入境檢驗檢疫行業標準SN/T1203-2010《食用油脂中轉基因植物成分實時熒光PCR定性檢測方法》、SNT?1204-2003《植物及其加工產品中轉基因成分實時熒光PCR定性檢驗方法》中規定了對35S、MON87708、EPSPS、BAR品系中轉基因成分的定性檢測。歐盟標準委員會《Quantitative?PCR?method?for?detection?of?soybean?event?MON87708》則公布了MON87708熒光PCR檢測方法。這些基因的檢測方法大都采用常規PCR方法或熒光PCR方法。

但常規PCR方法需要PCR擴增后進行電泳，不僅操作繁瑣，而且容易引起污染，還需要使用可能致癌的熒光燃料，而探針法熒光PCR方法雖然靈敏準確，但TaqMan探針的線性結構導致了較高的背景熒光，如果熒光基團和淬滅基團的距離太近，在PCR擴增過程中,探針在它們之間降解的可能性將大為降低，從而起不到探針的作用。相反，如果熒光基團和淬滅基團分別置于探針兩端，熒光背景信號加強，影響其檢測的靈敏度。TaqMan過高的特異性會導致一個堿基的也限定了其檢測目標過于狹窄，另外其合成成本較高，而且試劑有效期短，很容易降解，因而，不能在基層得到廣泛的應用。

發明內容

本發明的目的是為了克服現有技術中的不足之處，提供一種檢測轉基因大豆MON87708及內源基因Lectin的引物；

本發明還涉及一種包括上述引物且組分和配比合理，使用方便，檢測快捷，準確，適用于雙重熒光PCR檢測轉基因大豆MON87708及內源基因Lectin的試劑盒；