[發明專利]新型微柱凝膠法HIV抗體檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201510361772.2
• 申請日: 2015-06-27
• 公開（公告）號: CN104965079A
• 公開（公告）日: 2015-10-07
• 發明（設計）人: 王布強;徐丹
• 申請（專利權）人: 江陰金悅達生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/559
• 分類號: G01N33/559
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種新型微柱凝膠法HIV抗體檢測試劑盒及其制備方法，其特征在于：所述試劑盒包括微柱凝膠卡和指示紅細胞，所述微柱凝膠卡上有多個微柱管，每個微柱管中均包括若干個聚丙烯酰胺葡聚糖凝膠顆粒；所述指示紅細胞是結合抗HIV抗體的正常O型Rh陰性紅細胞或O型醛化紅細胞；

所述試劑盒的制備包括以下步驟：

一、微柱凝膠卡的制備

步驟一、凝膠懸浮介質的配制

所述凝膠懸浮介質配方如下：對羥基苯甲酸甲酯（5.?0~6.5）×l0^-4g／mL、對羥基苯甲酸丙酯（1.?2~1.5）×l0^-4g／mL、甘氨酸（1.?6~1.9）×l0^-2g／mL、氯化鈉（1.?6~1.8）×l0^-3g／mL、磷酸二氫鉀（2.?0~2.4）×l0^-4g／mL、磷酸氫二鈉（4.5~4.8）×l0^-4g／mL，以上試劑混合后用蒸餾水溶解，調pH值為6.6~6.8；

步驟二、凝膠的制備

選用大小為30~60nm的聚丙烯酰胺葡聚糖凝膠顆粒與步驟一配制的凝膠懸浮介質按照體積比2：1～6：1的比例混合后配制成凝膠；

步驟三、分裝

將步驟二配制的凝膠按照每管20~30uL的量，分別加入到微柱凝膠卡的微柱管中；

二、指示紅細胞的配制

步驟一、紅細胞醛化

1）紅細胞洗滌：將O型紅細胞以3000rpm離心1min，然后棄上清，用0.9%的生理鹽水洗滌6~8次后配制成5%紅細胞；

2）醛化處理：在1）所得的5%紅細胞和2.5%戊二醛按照體積比5:1~2:1進行混合；

3）洗滌：將2）醛化后的紅細胞以2500rpm離心2.5min，并用0.9%的生理鹽水溶液洗滌5~6次；

4）保存：用0.9%生理鹽水溶液把紅細胞濃度調成10~20%，然后在4℃下進行儲存，有效期二年；

步驟二、抗HIV抗體致敏醛化紅細胞的制備

1）配制：配制pH為6.6~7.5的磷酸鹽緩沖液（PBS）；

2）洗滌：取步驟一所得醛化后的紅細胞0.5mL，用生理鹽水洗滌2~4次，PBS洗滌1次，在3000rpm下離心3min后棄上清液，得到紅細胞懸浮于2mL?PBS中；

3）酸化：加入2mL37°C的PBS/5mgTCA（鞣酸）；（注：5mg鞣酸溶于100mL?PBS）；37°C水浴振蕩15min；

4）洗滌：生理鹽水洗滌1次，PBS洗滌1次后懸浮于2mL?PBS中；

5）標記：加入2mL?抗HIV抗體溶液；37°C下水浴振蕩60min；

6）快速用生理鹽水洗滌5次，PBS洗滌1次，用PBS保存備用。