[發明專利]一種堿性磷酸酶的酶促化學發光底物

有效

• 申請號: 201510359183.0
• 申請日: 2015-06-26
• 公開（公告）號: CN104990912B
• 公開（公告）日: 2018-04-20
• 發明（設計）人: 秦楓;馬竹鳳;王靜;張偉;李慶春
• 申請（專利權）人: 江蘇浩歐博生物醫藥股份有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/535
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司32103
• 代理人: 孫仿衛,林傳貴

技術領域

本發明涉及免疫技術檢測領域，特別涉及可用于化學發光免疫檢測的一種高效酶促化學發光底物。

背景技術

化學發光是指在一個反應體系中通過化學反應生成一種激發態的產物(C^*)，在其回到基態的過程中，釋放出的能量轉變成光子(能量hγ)，從而產生發光現象。

化學發光免疫分析是繼酶免技術、放免技術、熒光免疫技術之后發展起來的一種超高靈敏度的微量檢測技術，具備靈敏度高、檢測范圍寬、操作簡便快速、標記物穩定性好、無污染等優點，因此成為世界范圍內發展非常迅速的非放射性免疫分析技術，是目前免疫定量分析最理想的方法。

在化學發光免疫分析中，常用發光物質包括魯米諾、異魯米諾、吖啶酯、1,2-二氧雜環丁烷化合物(1,2-dioxetane compound)。其中異魯米諾和吖啶酯作為示蹤分子直接標記，屬于閃光型化學發光反應。魯米諾和1,2-二氧雜環丁烷化合物依靠酶作為示蹤分子標記，屬于酶促輝光型化學發光反應。1,2-二氧雜環丁烷化合物是最新的超靈敏的堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,AP)底物，在適宜的緩沖液中，隨著堿性磷酸酶(AP)的催化水解作用，1,2-二氧雜環丁烷化合物分解發出的信號可持續20小時以上，是理想的化學發光物質。國外生產廠家研制出以堿性磷酸酶(AP)為標記物，1,2-二氧雜環丁烷化合物-3-(2-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3-磷酰氧基)苯-1，2-二氧雜環丁烷(AMPPD)為底物的試劑盒，與之相匹配的有DPC、Access Substrate、BioMerieux、Olympus全自動化學發光系統。

然而AP催化AMPPD的化學反應是水解反應，雖然具有較長的平臺期，但是其發光強度較低，并且起光較慢，因此，該化學反應仍有待優化。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的目的是提供一種發光信號強、進入平臺期較快、持續時間長、常溫保存期長的堿性磷酸酶的酶促化學發光底物。

為了達到上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種堿性磷酸酶的酶促化學發光底物，其特征在于，所述化學發光底物以水為溶劑，含有以下組分：

2-氨基-2-甲基-1-丙醇；

AMPPD；

以及脂肪醇聚氧乙烯醚羧酸鈉與熒光化合物偶聯的發光增強劑(記作HOBEP系列化合物)。

脂肪醇聚氧乙烯醚羧酸鈉與熒光化合物的偶聯可起到共表面活性劑的作用，能使該復合物更好的結合到化學發光緩沖體系中。

當HOBEP系列化合物溶于水后，在濃度較低時呈單分子分散狀態，或被吸附在溶液的表面上，從而降低表面張力；而HOBEP系列化合物的濃度增加至溶液表面已經飽和而不能再吸附時，其分子即開始轉入溶液內部，由于HOBEP系列化合物分子的疏水部分與水的親和力較小，而疏水部分之間的吸引力較大，當達到一定濃度時，許多HOBEP系列化合物的疏水部分便相互吸引，締合在一起，形成締合體，即膠束，可觸發從激發態裂解產物到熒光表面活性劑之間的能量轉移，因此可大幅度提高化學發光效率。

其中，所述發光增強劑的結構式為以下的式(Ⅰ)、式(Ⅱ)、式(Ⅲ)、式(Ⅳ)及式(Ⅴ)的其中一種：

(1)HOBEP-1：與香豆素類熒光化合物偶聯

(2)HOBEP-2：與熒光素類熒光化合物偶聯

(3)HOBEP-3：與萘酰亞胺類熒光化合物偶聯

(4)HOBEP-4：與羅丹明類熒光化合物偶聯

(5)HOBEP-5：與苯并咪唑類熒光化合物偶聯

其中，

R₁選自C_1-28烷基的其中一種；

R₂選自以下取代基中的其中一種：鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、烷基、烷氧基、鹵代烷基、氨基、烷基氨基、酰胺基；

n取5-10的整數。

在具體實施例中，所述酶促化學發光底物還含有MgS0₄、ZnCl₂及防腐劑。

作為優選的具體實施方式，本發明的酶促化學發光底物以水為溶劑，含有以下組分：

在具體實施例中，所述防腐劑為ProClin300。