[發明專利]一種蛹蟲草液體培養基及蛹蟲草的培養方法

在審

• 申請號: 201510356495.6
• 申請日: 2015-06-25
• 公開（公告）號: CN105039467A
• 公開（公告）日: 2015-11-11
• 發明（設計）人: 郭狄
• 申請（專利權）人: 中山鼎晟生物科技有限公司
• 主分類號: C12P19/40
• 分類號: C12P19/40;C12R1/645
• 代理公司: 中山市銘洋專利商標事務所(普通合伙) 44286
• 代理人: 鄒常友

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種蛹蟲草液體培養基及蛹蟲草的培養方法。

背景技術

蛹蟲草(Cordycepsmilitaris)又名北冬蟲夏草，隸屬于子囊菌門Ascomycota糞殼菌綱Sordariomycetes，肉座菌目Hypocreales，蟲草科Cordycipitaceae，蟲草屬Cordyceps，是蟲草屬的模式種。野生蛹蟲草主要寄生于針葉林、闊葉林或混交林地表土層中的鱗翅目昆蟲的蛹體上，也有發現寄生于鞘翅目和雙翅目等昆蟲的蛹、成蟲或幼蟲體上。蛹蟲草含有多種生物活性物質，包括蟲草素、腺苷等核苷類物質、還包括蟲草多糖、SOD（超氧化物歧化酶）及氨基酸等，而其中最主要的活性成分為蟲草素，研究表明蟲草素具有調節免疫、抗腫瘤、抗真菌、抗白血病、降血脂等多種藥理活性，因此，市場需求越來越大。

蟲草素在蛹蟲草中的含量極低，雖然蟲草素可通過化學合成，但合成工藝復雜，產物回收率低，生產成本高，因此，目前研究最多的還是如何通過蛹蟲草發酵獲得蟲草素，但是如何優化蛹蟲草的培養條件，提高蛹蟲草生長及其中蟲草素的含量一直是備受關注的問題。本發明提供一種蛹蟲草液態深層培養方法，可快速生產蛹蟲草，同時還可提高其蟲草素的產量。

發明內容

本發明的目的是解決現有技術中存在的上述問題，提供一種蛹蟲草液體培養基，操作簡便，且蟲草素產量高。

本發明的技術方案如下：

一種蛹蟲草液體培養基，所述的培養基包括由以下含量的各組分組成：

KH2PO41-3g/L，

MgSO41-3g/L，

氮源5-20g/L，

馬鈴薯200-500g/L，

D-果糖8-15g/L，

瓊脂20-50g/L，

堿性氨基酸10-25g/L，

酸性氨基酸8-20g/L，

蠶蛹粉30-50g/L。

優選的，所述的氮源選自蛋白胨、牛肉膏或酵母膏中的一種或多種。

優選的，所述的蛋白胨的濃度為7.5-15g/L。

優選的，所述的D-果糖的濃度為10-12g/L。

優選的，所述的堿性氨基酸選自精氨酸、賴氨酸或組氨酸中的一種或多種。

優選的，所述的酸性氨基酸選自谷氨酸或天冬氨酸中的一種或多種。

優選的，所述的培養基的PH為5-8。

采用如上所述的蛹蟲草液體培養基進行蛹蟲草培養的方法，包括以下步驟：

（1）搖瓶培養：按KH2PO41-3g/L、MgSO41-3g/L、氮源5-20g/L、馬鈴薯200-500g/L、D-果糖8-15g/L、瓊脂20-50g/L、堿性氨基酸10-25g/L、酸性氨基酸8-20g/L、蠶蛹粉30-50g/L的基礎培養基配方進行配養基配制，高壓蒸汽滅菌10-30min，在常溫下冷卻后，裝于500ml的廣口瓶中，接種蛹蟲草菌種后，在無光照且培養溫度為25-28℃下，以150-200r/min搖瓶培養7-10d得到發酵液；

（2）蟲草素含量測定：步驟（1）中的培養結束后的發酵液，以3000-5000r/min離心10-30min，收集上清液，加水稀釋，經0.45um濾膜過濾，取濾液采用HPLC法測定蟲草素的含量。

優選的，步驟（1）中所述的接種的蛹蟲草菌種與培養基的體積比為1：（30-50）。

優選的，步驟（1）中在培養第4d時，加入腺嘌呤1-3g/L及甘氨酸16-40g/L。

本發明與現有技術相比，有益效果體現在：

1.蛹蟲草生長過程中98%的蟲草素分泌到培養基中，而從培養液中提取蟲草素，不僅提取方便，而且生產周期短，采用本發明中的液體培養基對蛹蟲草進行液態深層培養，可明顯提高蛹蟲草蟲草素的含量。

2.本發明采用D-果糖作為培養基中的碳源，其可明顯提高蟲草素的含量，明顯高于其他碳源（葡萄糖、淀粉、乳糖及纖維素等）；本發明將蛋白胨、牛肉膏或酵母膏三種有機氮源作為培養基的氮源，也可明顯提高蟲草素的產量。

3.氨基酸是構成蛋白質的基本成分，并與真菌的生命活動關系密切，國外學者研究顯示，在蛹蟲草培養時，添加一定量的甘氨酸、天冬氨酸等氨基酸時，可使蛹蟲草中的蟲草素含量明顯增加，本發明選擇對蛹蟲草蟲草素生長促進作用最強的三種堿性氨基酸及兩種酸性氨基酸，將其以一定比例添加于基礎培養基中，可顯示提高蛹蟲草蟲草素的產量。