[發明專利]一種基于原位制備的熒光銀納米簇檢測葡萄糖濃度的方法

有效

• 申請號: 201510345341.7
• 申請日: 2015-06-19
• 公開（公告）號: CN104865235B
• 公開（公告）日: 2017-06-23
• 發明（設計）人: 林權;陳陽;于聰;孫源卿;陳潔;楊雪;楊柏;董鳳霞
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 長春吉大專利代理有限責任公司22201
• 代理人: 王淑秋,王恩遠

1.一種基于原位制備的熒光銀納米簇檢測葡萄糖濃度的方法，具體步驟如下：

(1)將D-葡萄糖水溶液混合于葡萄糖氧化酶GOx和檸檬酸緩沖溶液中，加入去離子水使總體積為400μL，使得D-葡萄糖的終濃度為225～1200μM，葡萄糖氧化酶GOx的終濃度為5μg/mL，檸檬酸緩沖溶液終濃度為5mM，溶液的pH值為5～6，然后置于30～40℃水浴鍋中溫育2～3h；

(2)在上述步驟(1)的溶液中加入甲基丙烯酸MAA、FeSO₄水溶液和檸檬酸緩沖溶液，加入去離子水使混合后的總體積為500μL，使得甲基丙烯酸MAA的終濃度為100～500mM，FeSO₄的終濃度為1mM，檸檬酸緩沖溶液的終濃度為10mM，溶液的pH值為2.5～3.5，室溫放置20～60min，用分子量為500～1500Da的透析袋透析12～24h；

(3)取200μL步驟(2)制得的溶液加入AgNO₃水溶液，HAc-NaAc緩沖溶液，加入去離子水使混合后的總體積為400μL，使得AgNO₃的終濃度為20mM，HAc-NaAc緩沖溶液的終濃度為10mM，溶液的pH值為4.0～5.0，將樣品置于波長為302nm的紫外光下輻照2～8分鐘，然后在波長為480nm的激發光下測試495～800nm的熒光發射光譜；取熒光發射光譜中熒光發射最強處熒光強度的數值對葡萄糖濃度的對數值作圖，建立熒光發射強度與葡萄糖濃度的定量關系曲線；

(4)重復步驟(1)～(3)，測量未知濃度的D-葡萄糖水溶液的熒光發射光譜，將所得熒光發射光譜中熒光發射最強處熒光強度的數值代入步驟(3)的定量關系曲線，從而得到D-葡萄糖水溶液的濃度。

2.如權利要求1所述的一種基于原位制備的熒光銀納米簇檢測葡萄糖濃度的方法，其特征在于：步驟(2)中所述的甲基丙烯酸MAA的終濃度為400mM。

3.如權利要求1所述的一種基于原位制備的熒光銀納米簇檢測葡萄糖濃度的方法，其特征在于：步驟(3)中所述的紫外光下的輻照時間為4分鐘。