[發(fā)明專利]高效液相色譜法測定塞來昔布膠囊中對(duì)磺酰胺基苯肼鹽酸鹽含量的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510344230.4
• 申請(qǐng)日: 2015-06-21
• 公開（公告）號(hào): CN104897841A
• 公開（公告）日: 2015-09-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王靜;王崇益;王沛沛;葛嘉誠
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇正大清江制藥有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/88
• 分類號(hào): G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及高效液相色譜技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高效液相色譜測定塞來昔布膠囊中對(duì)磺酰胺基苯肼鹽酸鹽含量的方法。

背景技術(shù)

塞來昔布原料生產(chǎn)過程中可能存在對(duì)磺酰胺基苯肼鹽酸鹽帶入。該化合物結(jié)構(gòu)與已知基因毒雜質(zhì)有類似性，需對(duì)其進(jìn)行限度控制。按照ICH規(guī)定基因毒雜質(zhì)的人體攝入量不能超過每人每天1.5μg，因此我們建立了塞來昔布膠囊中對(duì)磺酰胺基苯肼的HPLC-UV測定法，可以更好的控制塞來昔布膠囊的產(chǎn)品質(zhì)量，更好的對(duì)塞來昔布膠囊中可能存在的對(duì)磺酰胺基苯肼鹽酸鹽雜質(zhì)進(jìn)行檢測。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是建立一個(gè)測定塞來昔布膠囊中對(duì)磺酰胺基苯肼鹽酸鹽含量的方法，可以更好的控制塞來昔布膠囊的質(zhì)量，更好的對(duì)塞來昔布膠囊中可能存在的對(duì)磺酰胺基苯肼鹽酸鹽雜質(zhì)進(jìn)行檢測。

?本發(fā)明的技術(shù)方案是：高效液相色譜測定塞來昔布膠囊中對(duì)磺酰胺基苯肼鹽酸鹽含量的方法，它包括如下步驟：

?(1)?對(duì)照品溶液的制備：稱取對(duì)磺酰胺基苯肼鹽酸鹽對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含500ng的對(duì)磺酰胺基苯肼鹽酸鹽溶液；

?(2)?供試品溶液的制備：取塞來昔布膠囊內(nèi)容物加甲醇制成每1ml含150mg塞來昔布的溶液；

?(3)?測定：高效液相色譜儀的固定相為十八烷基鍵合石墨碳，流動(dòng)相A為10mmol/L乙酸銨水溶液-甲醇=45:55～55:45，流動(dòng)相B為甲醇，柱溫為30℃～40℃，流動(dòng)相A初始流速為0.78～0.82ml/min，檢測波長為218nm～222nm分別吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各15～25μl，注入高效液相色譜儀，讀取數(shù)據(jù)。

?所述高效液相色譜儀的檢測器為紫外吸收檢測器，檢測波長為220nm。

?所述流動(dòng)相A為10mmol/L乙酸銨水溶液-甲醇=50:50，流動(dòng)相B為甲醇。其運(yùn)行梯度方式見表1：

。

?本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明應(yīng)用高效液相色譜測塞來昔布膠囊中對(duì)磺酰胺基苯肼鹽酸鹽含量，分離效率高、分析速度快、檢測靈敏度高，通過檢測塞來昔布膠囊中對(duì)磺酰胺基苯肼的鹽酸鹽含量，控制每粒塞來昔布膠囊中對(duì)磺酰胺基苯肼鹽酸鹽不得過0.75μg，以利于更好控制塞來昔布膠囊的質(zhì)量，更好的對(duì)塞來昔布膠囊中可能存在的對(duì)磺酰胺基苯肼鹽酸鹽雜質(zhì)進(jìn)行檢測。

附圖說明：圖?1為空白輔料溶液色譜圖；

圖?2為對(duì)照溶液色譜圖；

圖?3為樣品溶液色譜圖；

圖4為對(duì)磺酰胺基苯肼鹽酸鹽的線性回歸圖；

圖5為流速變化測試結(jié)果對(duì)比圖；

圖6為流動(dòng)相A比例變化測試結(jié)果對(duì)比圖；

圖7為進(jìn)樣量變化測試結(jié)果對(duì)比圖；

圖8為檢測波長變化測試結(jié)果對(duì)比圖；

圖9為柱溫變化測試結(jié)果對(duì)比圖。

以下通過實(shí)施例形式再對(duì)本發(fā)明的內(nèi)容作進(jìn)一步詳細(xì)說明，但不應(yīng)就此理解為本發(fā)明上述主題范圍內(nèi)僅限于以下實(shí)施例。在不脫離本發(fā)明上述技術(shù)前提下，根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段做出的相應(yīng)替換或變更的修改，均包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。

實(shí)施例1色譜柱的確定

儀器：高效液相色譜儀?Thermo?Ultimate3000，紫外檢測器

色譜柱：Waters?Xterra?RP，150mm×4.6mm×3.50μm,?十八烷基鍵合硅膠為填料

流速：0.7ml/min??；

進(jìn)樣量：20μl?；

柱溫：35℃；

波長：247nm；

流動(dòng)相：?10mmol/L乙酸銨水溶液-甲醇=70:30；

對(duì)照品溶液的配制：精密稱取對(duì)磺酰胺基苯肼鹽酸鹽2mg，至于200ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。精密量取上述溶液0.5ml至于10ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻即得。

取流動(dòng)相、對(duì)磺酰胺基苯肼鹽酸鹽50ng/ml溶液，分別進(jìn)樣記錄色譜圖。

溶劑峰在4.0min處有較小吸收，對(duì)磺酰胺基苯肼鹽酸鹽在3.8min處出峰。

結(jié)論：在該方法條件下，流動(dòng)相作為溶劑對(duì)磺酰胺基苯肼鹽酸鹽的測定有干擾。

?實(shí)施例2色譜柱的確定

儀器：高效液相色譜儀?Thermo?Ultimate3000，紫外檢測器

色譜柱：Inertsil?ODS-3，150mm×4.6mm×3.00μm,?十八烷基鍵合硅膠為填料。

流速：0.7ml/min??；

進(jìn)樣量：20μl?；

柱溫：35℃；