[發明專利]交聯固定脂肪酶的超順磁載體的制備方法

有效

• 申請號: 201510343433.1
• 申請日: 2015-06-19
• 公開（公告）號: CN105037596B
• 公開（公告）日: 2017-03-01
• 發明（設計）人: 劉曉慧;張維;呂才有;楊金玲
• 申請（專利權）人: 云南農業大學
• 主分類號: C08F120/54
• 分類號: C08F120/54;C08F2/44;C08K9/04;C08K9/06;C08K3/22;C12N11/08
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司53100
• 代理人: 徐玲菊,蔣文睿

1.一種交聯固定脂肪酶的超順磁載體的制備方法，其特征在于經過下列各步驟：

（1）納米磁性微球Fe₃O₄的制備：

將FeCl₃·6H₂O溶解于無水乙二醇中，配置成濃度為0.1～0.15mmol/mL的溶液，再按FeCl₃·6H₂O與處理劑的質量比為1:（4～6）加入處理劑，其中處理劑為乙酸鈉和聚乙二醇，加入處理劑后使乙酸鈉的濃度為80～120mg/mL，然后在200℃下恒溫超聲反應4～6h，待自然冷卻后，用乙醇和去離子水洗滌數次，再經真空干燥即得納米磁性微球Fe₃O₄；

（2）納米磁性微球Fe₃O₄的包裹：

將步驟（1）所得納米磁性微球Fe₃O₄與濃度為1mol/L的NaOH溶液混合，直至得到納米磁性微球Fe₃O₄的濃度為4～8mg/mL的懸浮液，將懸浮液經超聲波分散均勻，然后加入3倍懸浮液體積的無水乙醇、加入納米磁性微球Fe₃O₄質量1/5～1/10的包埋劑以及加入懸浮液體積1/2的氨水，再在100℃下攪拌反應40min得到磁流體，然后將磁流體在1～2T的磁場條件下靜置完成磁分離，再對磁流體進行固液分離，所得固體用乙醇和去離子水洗滌數次，即得包裹后的納米磁性微球Fe₃O₄；

（3）納米微球的功能化修飾：

按（0.2～0.8）:200的固液比g/mL計，將步驟（2）所得包裹后的納米磁性微球Fe₃O₄超聲分散于甲醇中，再按包裹后的納米磁性微球Fe₃O₄與N-異丙基丙烯酰胺的質量比為（0.2～0.8）:4.05加入N-異丙基丙烯酰胺，按包裹后的納米磁性微球Fe₃O₄與偶氮二異丁腈的質量比為（0.2～0.8）:0.15加入偶氮二異丁腈，得到反應體系，然后將反應體系置于氮氣保護下以70℃反應12h，后將反應物置于沉淀劑中進行反復沉淀，直到無沉淀析出；將所得沉淀物進行真空干燥，即得到交聯固定脂肪酶的超順磁載體。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述步驟（1）或（2）中的乙醇和去離子水洗滌數次是指先用乙醇和去離子水交替洗滌數次后，再用去離子水洗滌。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述步驟（2）的包埋劑為正硅酸乙酯或海藻酸鉀。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述步驟（3）的沉淀劑為乙醚或正己烷。

5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述無水乙二醇、乙酸鈉、聚乙二醇、甲醇、N-異丙基丙烯酰胺、偶氮二異丁腈、正硅酸乙酯和海藻酸鉀均為市購分析純。

6.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于：所述正硅酸乙酯和海藻酸鉀均為市購分析純。

7.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于：所述乙醚和正己烷均為市購分析純。