[發明專利]PI3K/Akt信號通路在巨噬細胞內布魯氏菌存活中的應用

在審

• 申請號: 201510340123.4
• 申請日: 2015-06-18
• 公開（公告）號: CN104940931A
• 公開（公告）日: 2015-09-30
• 發明（設計）人: 張俊波;印雙紅;羅靜;李建新;冉輝;李默
• 申請（專利權）人: 銅仁學院
• 主分類號: A61K45/00
• 分類號: A61K45/00;A61P31/04
• 代理公司: 東莞市中正知識產權事務所 44231
• 代理人: 徐康

技術領域

本發明涉及藥物領域，具體是PI3K/Akt信號通路在胞內布魯氏菌存活中的應用。

背景技術

布魯氏菌病是一種嚴重危害人和家畜健康的人獸共患傳染病。布魯氏菌為革蘭氏陰性的兼性胞內寄生菌，其急性期的臨床特點主要為惡寒、發熱、關節和肌肉痛等；人感染布魯氏菌后造成骨關節、神經系統、生殖系統和免疫系統等損害，慢性期主要癥狀為骨關節病及包括神經系統在內的多系統多器官的損害，患者會一般會表現出神經-精神癥狀，病程較長，容易復發并再感染，從而導致勞動力的喪失。動物布魯氏菌病的特點是生殖器官、胎膜及其它多種器官組織發炎、壞死和肉芽腫的形成，引起流產、睪丸炎及關節炎等癥狀。布魯氏菌病給人類健康和畜牧業和諧發展帶來嚴重危害。因此，研究布魯氏菌及對宿主細胞的致病機制，為布魯氏菌疫苗研發和和防空提供理論基礎，對于國民經濟的發展和社會的安全具有重大的意義。

PI3K/Akt信號轉導通路是重要的細胞生存通路之一，Akt作為PI3K/Akt信號轉導通路的關鍵分子，在促進細胞生存、生長、增殖；促進細胞運動、侵襲和轉移；抑制細胞凋亡方面起核心作用。PI3K/Akt信號通路與腫瘤的發生發展密切相關，在多種腫瘤組織有Akt的過度表達和活化。PI3K/Akt信號通路還與一些病毒的生存繁殖密切相關，然而，PI3K/Akt信號通路與布魯氏菌的生存關系如何，目前還尚無相關報道。

發明內容

本發明的目的在于提供PI3K/Akt信號通路在胞內布魯氏菌存活中的應用，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

PI3K/Akt信號通路在胞內布魯氏菌存活中的應用，PI3K/Akt信號通路促進布魯氏菌存活。

作為本發明進一步的方案：所述布魯氏菌包括粗糙型菌株RB51和光滑型菌株S2308。

作為本發明進一步的方案：PI3K/Akt信號通路促進光滑型的S2308存活。

與現有技術相比，本發明的有益效果是：

本發明發現PI3K/Akt信號通路在布魯氏菌致病過程中發揮重要作用，因此，研究PI3K/Akt信號通路在布魯氏菌致病過程中的作用，有助于揭示布魯氏菌的致病機制，為抗布魯氏菌藥物的研制提供理論基礎。

附圖說明

圖1是布魯氏菌對PI3K/Akt信號通路的激活圖；

圖2是抑制劑LY對細胞活性的影響示意圖；

圖3是抑制劑LY對胞內布魯氏菌存活的影響。

具體實施方式

下面將結合本發明實施例，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。

實施例1

1材料與方法

1.1?材料

1.1.1?菌株、細胞與質粒?牛種布魯氏菌參考株2308和牛種布魯氏菌疫苗株RB51由石河子大學人畜共患病實驗室提供、大腸桿菌DH5a由本實驗室保存。

1.1.2?主要試劑?無內毒素質粒大提試劑盒、增強型?HRP-DAB?試劑盒購自天根生化(北京)科技有限公司；胎牛血清購自GIBCO公司；細胞轉染試劑LipofectamineTM2000購自Invitrogen公司；酵母提取物（Yeast?Extract），蛋白胨（Tryptone），NaCl購自Oxoid公司；瓊脂糖購自上海生物工程技術有限公司。MTT、DMSO?購自索萊寶公司；LY?購自碧云天公司，以DMSO作為溶劑，兔抗鼠磷酸化Akt(Ser473)和Akt(Thr308)以及Akt單克隆抗體，HRP-羊抗兔二抗購自Cell?Signaling?Technology公司；β-actin購于購自bioworld公司；ECL熒光檢測試劑盒購于Thermo公司；BCA?蛋白定量試劑盒購于上海生物工程技術有限公司。

1.2.3?布魯氏菌侵染小鼠巨噬細胞RAW264.7將16M用PBS洗脫菌體，利用細菌比濁法計算數量，按比例通過10倍稀釋菌懸液，然后將懸液涂于固體培養基上，置于37℃、10%?CO₂培養箱中培養3天，每個稀釋濃度重復3次，進行計數取平均值確定布魯氏菌數目。以50:1（細菌個數：細胞個數）的比例，用16M侵染RAW264.7細胞，并將侵染后的RAW264.7細胞置于37℃、5%CO₂培養箱中繼續培養。