[發明專利]一種抑制劑LY294002的用途

有效

• 申請號: 201510339728.1
• 申請日: 2015-06-18
• 公開（公告）號: CN104958301A
• 公開（公告）日: 2015-10-07
• 發明（設計）人: 舒華;姚元勇;唐幫成;謝子楠;吳思展
• 申請（專利權）人: 銅仁學院
• 主分類號: A61K31/5377
• 分類號: A61K31/5377;A61P31/04
• 代理公司: 東莞市中正知識產權事務所 44231
• 代理人: 徐康

技術領域

本發明涉及藥物領域，具體是一種抑制劑LY294002的用途。

背景技術

布魯氏菌病是一種嚴重危害公共衛生安全的人獸共患傳染病。布魯氏菌既是一種革蘭氏陰性菌，也是兼性胞內寄生菌。布魯氏菌病急性期的癥狀主要為惡寒、發熱和關節等；人感染布魯氏菌后主要表現出神經-精神癥狀，一般病程較長，容易復發反復感染。動物布魯氏菌病后導致胎膜及其它多種器官組織發炎、壞死和肉芽腫的形成，導致懷孕母畜流產、公畜患睪丸炎及關節炎等癥狀。布魯氏菌病嚴重危害人類健康和畜牧業的發展。然而，目前無有效的疫苗控制該病的發生，主要原因之一為其致病機制還不清楚。

PI3K/Akt信號通路細胞生存對細胞的生存至關重要，在細胞生長活動和抑制細胞凋亡方面起核心作用。PI3K/Akt信號通路主要與腫瘤的發展密切相關，還與一些病毒的生存繁殖有關，然而，PI3K/Akt信號通路與布魯氏菌的生存關系如何，目前還尚無相關報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種抑制劑LY294002的用途,以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種抑制劑LY294002的用途，用于抑制羊種布魯氏菌16M的存活。

作為本發明進一步的方案：所述抑制劑LY294002的最佳劑量為20μmol/L。

與現有技術相比，本發明的有益效果是：本發明將PI3K/Akt信號通路抑制劑LY294002與細胞共同孵育，同時將其腹腔注射小鼠，然后羊種布魯氏菌16M感染巨噬細胞和小鼠，首次發現抑制劑LY294002可調控巨噬細胞和小鼠體內羊種布魯氏菌16M的存活，抑制劑LY294002顯著提高了布魯氏菌介導的TNF-α，提高宿主抵抗羊種布魯氏菌16M感染的能力。表明PI3K/Akt信號通路在布魯氏菌致病過程中發揮重要作用，PI3K/Akt信號通路抑制劑LY294002可調控巨噬細胞和小鼠體內羊種布魯氏菌16M的存活，為抗布魯氏菌藥物研發和其致病機制提供科學依據。

附圖說明

圖1是抑制劑LY294002對細胞活性的影響結果示意圖；

圖2是抑制劑LY294002抑制16M在巨噬細胞內的繁殖結果示意圖，注：“*”表示胞內細菌數量在16M組與16M+LY組中的差異顯著(P<0.05)；

圖3是抑制劑LY294002降低16M在小鼠脾臟和肝臟的存活結果示意圖，注：“*”表示脾臟和肝臟中細菌數量在16M組與16M+LY組中的差異顯著(P<0.05)；

圖4是抑制劑LY294002提高16M介導的巨噬細胞中TNF-α的含量結果示意圖，注：“*”表示TNF-α含量在16M組與16M+LY組中的差異顯著(P<0.05)。

具體實施方式

下面將結合本發明實施例，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。

實施例1

1材料與方法

1.1?材料

1.1.1?菌株、細胞與質粒

羊種布魯氏菌16M來自石河子大學人畜共患病實驗室、大腸桿菌DH5a來自銅仁學院細胞生物學實驗室。

1.1.2?主要試劑

胎牛血清購自海克隆公司；酵母提取物、蛋白胨、NaCl購自上海生工公司；Triton?X-100細胞裂解液、MTT和DMSO購自索萊寶公司；抑制劑LY294002?購自碧云天公司；小鼠TNF-αELISA試劑盒均購自上海依科賽生物制品有限公司。

1.1.3?主要儀器

生物安全柜；CO₂培養箱；低溫高速離心機；酶標檢測儀，電子天平。

1.2?方法

1.2.1?MTT試驗

將抑制劑LY294002（20μmol/L）與巨噬細胞共同孵育，0.1%DMSO處理的細胞作對照。置37℃、5%CO₂培養箱使細胞貼壁，培養6-24h。加入適當濃度的受試化合物，繼續培養適當時間。小心吸取上清，加入90μL新鮮培養液，再加入10μL?MTT溶液，繼續培養4h。棄去上清，每孔加入110μL?Formazan溶解液，置搖床上低速振蕩10min，使結晶充分溶解，在酶聯免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。同時設置調零孔，對照孔，每組設定3復孔。