[發(fā)明專(zhuān)利]從龍眼肉中分離木犀草素5?O?β?葡萄糖苷的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510333851.2
• 申請(qǐng)日: 2015-06-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105175464B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-03-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 遆慧慧;張名位;魏振承;張瑞芬;張雁;唐小俊;鄧媛元;劉磊;馬永軒;郭錦欣
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品加工研究所;廣州力衡臨床營(yíng)養(yǎng)品有限公司;廣東寶桑園健康食品有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07H17/07
• 分類(lèi)號(hào): C07H17/07;C07H1/08
• 代理公司: 廣州知友專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司44104
• 代理人: 宣國(guó)華,馬赟齋

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及龍眼肉中分離酚類(lèi)化合物的方法，尤其涉及從龍眼肉中分離木犀草素5-O-β-葡萄糖苷的方法。

背景技術(shù)

龍眼被譽(yù)為“果中圣品”，有“南方人參”的美稱(chēng)，在我國(guó)栽培歷史悠久，主要分布于福建、廣西、廣東、四川和臺(tái)灣省，是我國(guó)南方的特色大宗水果，其中廣東省龍眼種植面積12.9萬(wàn)公頃，年產(chǎn)55.48萬(wàn)噸，對(duì)當(dāng)?shù)剞r(nóng)業(yè)和經(jīng)濟(jì)發(fā)展起重要作用。龍眼果肉不僅營(yíng)養(yǎng)豐富，并且具有很高的藥用功效。《本草綱目》中記載“食品以荔枝為貴，而資益以龍眼為良”，認(rèn)為龍眼肉具有“開(kāi)胃健脾，補(bǔ)虛益智”的功效。中醫(yī)學(xué)著作中也有記載，龍眼果肉可用于治療脾虛泄瀉，自汗盜汗，心血不足，失眠健忘等癥狀。已有研究人員對(duì)荔枝果肉生物活性做了初步探索，報(bào)道荔枝果肉富含酚類(lèi)物質(zhì)具有抗氧化、抗輻射和保護(hù)肝臟等生物活性。

龍眼資源在我國(guó)華南地區(qū)非常豐富，如果對(duì)龍眼果肉進(jìn)行深入系統(tǒng)的研究，確定其抗氧化作用物質(zhì)基礎(chǔ)、鑒定其單體的化學(xué)結(jié)構(gòu)、明析其作用機(jī)理，并在此基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)出可降低慢性疾病發(fā)生發(fā)展的功能食品，不僅可以充分利用龍眼資源，而且還可以減少慢性疾病的發(fā)病率、促進(jìn)人們的健康水平、創(chuàng)造出較大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。已有研究表明，龍眼果肉中含有豐富的酚類(lèi)化合物，目前已從龍眼果肉中分離得到的酚類(lèi)化合物(見(jiàn)下式和表1)。大量試驗(yàn)表明龍眼果肉中的酚類(lèi)化合物有較強(qiáng)的抗氧化、延緩衰老功效，是龍眼果肉抗氧化活性的主要功效物質(zhì)。Rangkadilok等用70％甲醇從龍眼果肉中提取得到的酚類(lèi)物質(zhì)主要為沒(méi)食子酸、鞣花單寧、鞣花酸(Rangkadilok et al.，2005)。Jian Sun用聚酰胺柱和Sephadex LH-20凝膠柱層析法分離純化果肉中酚類(lèi)物質(zhì)，鑒定得到4-O-甲基沒(méi)食子酸和(-)-表兒茶素(Jian et al.，2007)。其中4-O-甲基沒(méi)食子酸表現(xiàn)出較高的DPPH和自由基清除活性，而后者證實(shí)與龍眼果肉的褐變反應(yīng)相關(guān)。王志遠(yuǎn)采用普魯士蘭法測(cè)定了龍眼果肉70％丙酮提取物中多酚和單寧的含量分別約為0.90±0.06mg/g和0.56±0.06mg/g(王志遠(yuǎn)等，2008)。萬(wàn)紅霞比較了不同濃度的甲醇、乙醇、丙酮對(duì)多酚提取含量的影響，結(jié)果顯示以70％丙酮為提取劑時(shí)，多酚提取量達(dá)到最大，為51.5±1.4mg/100g(萬(wàn)紅霞，2011)。肖毅美用HPLC的方法測(cè)定了不同品種龍眼果肉中酚類(lèi)物質(zhì)的組成和含量，發(fā)現(xiàn)酚類(lèi)單體含量最大的是表兒茶素，其次是四甲基鄰苯二酚和香豆素(肖毅美，2011)。酚類(lèi)物質(zhì)在抗氧化、延緩衰老等方面具有較強(qiáng)的作用，這與龍眼果肉的生理功效是一致的。

表1從龍眼果肉中分離出的酚類(lèi)化合物

目前，沒(méi)有人從龍眼果肉中分離得到木犀草素5-O-β-葡萄糖苷。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種從龍眼肉中分離木犀草素5-O-β-葡萄糖苷的方法。該方法工藝簡(jiǎn)單，條件容易控制，易于產(chǎn)業(yè)化，為它在廣泛范圍內(nèi)使用提供了方便。

本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：從龍眼肉中分離木犀草素5-O-β-葡萄糖苷的方法，包括以下步驟：

(1)用丙酮提取龍眼果肉，獲得丙酮提取物；

(2)所述丙酮提取物上大孔樹(shù)脂分離柱，先后用超純水和95％乙醇溶液進(jìn)行洗脫，收集乙醇溶液，濃縮至乙醇完全回收；

(3)所述濃縮液上聚酰胺樹(shù)脂柱，依次用水以及體積分?jǐn)?shù)為10％、20％的乙醇進(jìn)行梯度洗脫，而后采用體積分?jǐn)?shù)為25-35％的乙醇進(jìn)行洗脫，收集洗脫液；

(4)將25-35％乙醇的洗脫液注入高效液相色譜儀，用甲醇-水進(jìn)行洗脫，收集含有木犀草素5-O-β-葡萄糖苷的級(jí)分，濃縮，干燥獲得木犀草素5-O-β-葡萄糖苷。

本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式，所述步驟(1)具體操作為：取鮮龍眼果肉，按質(zhì)量體積比1:2-5加入4℃預(yù)冷的80％丙酮，破碎組織，之后用均質(zhì)機(jī)在冰水浴下，4500-5500rpm均質(zhì)4-6分鐘，然后離心，取上清液，果渣重復(fù)提取一次，合并兩次上清液，真空濃縮至40mL，-80℃冷藏備用。

所述離心轉(zhuǎn)速4500-5500rpm。

所述步驟(2)中的超純水和95％乙醇溶液的用量分別為2L。

所述步驟(3)中的水和乙醇的用量分別為2L。

所述步驟(4)中甲醇-水中甲醇和水體積比為45﹕55；流速5mL/min，所述干燥為冷凍干燥。

本發(fā)明的有益效果：