[發(fā)明專利]一種內(nèi)生菌發(fā)酵茶及其制備方法

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• 申請日: 2015-06-17
• 公開（公告）號: CN104982571A
• 公開（公告）日: 2015-10-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 杜超峰
• 申請（專利權(quán)）人: 杜超峰
• 主分類號: A23F3/14
• 分類號: A23F3/14;A23F3/08
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種內(nèi)生菌發(fā)酵茶，其特征在于由1-99.99重量份茶葉、0.01-30重量份石斛內(nèi)生菌菌液和/或松露產(chǎn)香菌菌液制備而成。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種內(nèi)生菌發(fā)酵茶，其特征在于所述茶葉為茶青、半成品茶或成品茶。

3.權(quán)利要求1所述的一種內(nèi)生菌發(fā)酵茶，其特征在于其制備方法包含以下步驟：

步驟1：采摘茶樹鮮葉或石斛伴生茶鮮葉，攤放1-20h，以60-280℃殺青1-30min，將殺青葉冷卻，以揉搶機(jī)揉搶10-30min，得揉搶葉；

步驟2：將得到的揉搶葉或成品茶分裝于透明玻璃容器中，擠壓至裝滿為止，密封，于121℃高壓蒸汽下滅菌10-20min，冷卻后得滅菌茶葉，備用；

步驟3：將得到的滅菌茶葉，按每100g滅菌茶葉的量接種0.5ml-200ml石斛內(nèi)生菌菌液和/或松露產(chǎn)香菌菌液，在10-60℃下培養(yǎng)發(fā)酵1-60天，取出于60-300℃下烘焙或曬干至水分含量為5％-7％，得到內(nèi)生菌發(fā)酵茶。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的一種內(nèi)生菌發(fā)酵茶，其特征在于石斛內(nèi)生菌菌液由以下方法制備：

步驟1：將新鮮石斛的莖、葉、菌根、假鱗莖、花或果實在無菌條件下，以75％酒精處理30s，再用0.1％升汞處理7min后用無菌水沖洗，吸干多余水分，分別切成0.5cm左右的小段或用無菌研缽磨成漿狀，分別接種在查氏培養(yǎng)基和PDA培養(yǎng)基上，在20-50℃恒溫培養(yǎng)1-10d，長出不同類型的微生物，對不同形態(tài)、不同顏色的菌落進(jìn)行初步分類，并在相應(yīng)的培養(yǎng)基純化獲得一批石斛內(nèi)生菌的微生物菌株，然后用篩選培養(yǎng)基發(fā)酵實驗，利用薄層層析法定性檢測發(fā)酵液石斛多糖和高效液相色譜定量檢測發(fā)酵液中石斛多糖的含量，富產(chǎn)石斛多糖的菌株即為篩選的石斛內(nèi)生菌；所述篩選培養(yǎng)基為：葡萄糖1-50g/L、蛋白胨1-10g/L、硫酸銨0.1-10g/L，氯化錳0.01-10g/L、硫酸鎂0.1-10g/L、磷酸二氫鉀0.1-5g/L、茶葉汁200-800ml/L。

步驟2：取石斛內(nèi)生菌在液體搖瓶中擴(kuò)大培養(yǎng)；然后按1-10％的接種量接入裝有20-90mL發(fā)酵培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，在搖床轉(zhuǎn)速10-600rpm，溫度20-60℃條件下，培養(yǎng)1-48h得到石斛內(nèi)生菌菌液；發(fā)酵培養(yǎng)基的成份為：葡萄糖0.1-20g/L、蛋白胨0.1-20g/L、酵母膏0.1-10g/L、氯化鈉0.1-10g/L、磷酸二氫鉀0.1-10g/L；培養(yǎng)基初始pH5-8。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的一種內(nèi)生菌發(fā)酵茶，其特征在于松露產(chǎn)香菌菌液由以下方法制備：

步驟1：將新鮮松露的子囊果或共生菌根在無菌條件下，以75％酒精處理30s，再用0.1％升汞處理7min后用無菌水沖洗，吸干多余水分，用無菌研缽磨成漿狀，分別接種在查氏培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基和改良MS培養(yǎng)基上，在20-50℃恒溫培養(yǎng)1-10d，長出不同類型的微生物，對不同形態(tài)、不同顏色的菌落進(jìn)行初步分類，并在相應(yīng)的培養(yǎng)基純化獲得一批松露微生物菌株，然后用篩選培養(yǎng)基發(fā)酵實驗，利用薄層層析法定性檢測發(fā)酵液a-雄烷醇和高效液相色譜定量檢測發(fā)酵液中a-雄烷醇的含量，富產(chǎn)a-雄烷醇的菌株即為篩選的松露產(chǎn)香菌；所述篩選培養(yǎng)基為：葡萄糖或蔗糖1-50g/L、蛋白胨1-10g/L、硫酸鎂0.1-10g/L、磷酸二氫鉀0.1-5g/L、茶葉汁200-800ml/L。

步驟2：取松露產(chǎn)香菌，在液體搖瓶中擴(kuò)大培養(yǎng)；然后按1-10％的接種量接入裝有20-90mL發(fā)酵培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，在搖床轉(zhuǎn)速10-600rpm，溫度20-60℃條件下，培養(yǎng)時間1-48h得到松露產(chǎn)香菌菌液；發(fā)酵培養(yǎng)基的成份為：葡萄糖或蔗糖0.1-100g/L、蛋白胨和/或麩皮(浸出汁)0.1-100g/L、酵母膏或松針(浸出液)0.1-100g/L、硫酸鎂和/或氯化鈣0.1-10g/L、磷酸二氫鉀0.1-10g/L；培養(yǎng)基初始pH5-8。