[發明專利]一種布魯氏菌活疫苗的生產方法

有效

• 申請號: 201510332593.6
• 申請日: 2015-06-16
• 公開（公告）號: CN104840955B
• 公開（公告）日: 2017-11-21
• 發明（設計）人: 朱良全;丁家波;毛開榮;蔣卉;寧宜寶;王楠
• 申請（專利權）人: 中國獸醫藥品監察所
• 主分類號: A61K39/10
• 分類號: A61K39/10;A61P31/04
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所(普通合伙)11305
• 代理人: 鄭明

技術領域

本發明涉及一種布魯氏菌活疫苗的生產方法。屬于獸用生物制品領域。

技術背景

布魯氏菌病(Brucellosis)簡稱布病，是由布魯氏菌屬細菌引起的以感染家畜為主的人畜共患傳染病。世界動物衛生組織(OIE)將其列為多種動物疫病，我國將其列為二類動物疫病。

近年來，我國布病疫情形勢嚴峻，對人體健康和畜牧業的發展造成了嚴重的危害。目前，我國主要采取以預防為主的防疫措施，所以，布病疫苗產品質量優劣直接關系到全國布病疫情的有效控制。

我國與人類布病有關的傳染源主要是患病羊、牛。感染動物可從乳汁、糞便和尿液中排出病原菌，長期或終身帶菌，當患病母畜流產時，大量病菌隨著流產胎兒、胎衣和子宮分泌物一起排出，成為最危險的傳染源。對于動物布病防控，我國主要采取檢疫淘汰與免疫相結合的策略。

布病疫苗是實施控制動物布病的重要手段。我國現有的動物布病疫苗有豬布魯氏菌2號弱毒活菌苗(S2株)、羊種布魯氏菌5號弱毒活菌苗(M5株)，以及很早從國外引進的牛種布魯氏菌活疫苗A19株。由于M5株毒力近幾年檢測，已返強，現基本不用，而A19主要用于牛，因其含有殘余的毒力，可導致1％～2.5％的懷孕母牛流產，使用范圍也較少。S2株是由本實驗室老一輩科學家于上世紀50～60年代從豬胚篩選出的豬種布魯氏菌自然減毒變種選育而成，也是當前唯一株對豬、牛、羊均具有良好免疫保護力，且安全性良好的應用最為廣泛的疫苗株。據2011～2013年中國獸醫藥品監察所生物制品產品批簽發的統計數據，我國每年使用S2株疫苗達1.5億頭份以上，占動物布病疫苗的98％以上。

我國應用的布魯氏菌活疫苗CVCC 70502株(S2株)(農林部獸醫藥品監察所布氏菌組，布病豬型二號菌苗的特性及其免疫效力(一)，中國農業科學，1975，(2):77～87)，對豬、牛、羊均有堅強免疫力，毒力穩定、安全，在我國動物布魯氏菌病防控中發揮了重要作用。但存在以下突出問題：疫苗采用1％～2％明膠、5％～10％蔗糖、1％～3％硫脲為保護劑，組方簡單，凍干存活率低(一般為60％～70％)，37℃7日保護功能較差(活菌減少率達80％以上)，而且不適宜2～8℃長期保存(2～8℃保存6個月，其活菌減少率達40％以上)。

對于細菌活疫苗，每頭份活菌含量是影響疫苗效力的重要指標。因傳統疫苗2～8℃保存6個月后，活菌減少率達40％以上。因此，按現行《中國獸藥典》(中國獸藥典委員會編.中華人民共和國獸藥典，二〇一〇年版，三部.中國農業出版社，2011年，以下簡稱《中國獸藥典》)推薦的最低標準劑量凍干出廠合格的疫苗，經2～8℃保存6個月后將失效，其每頭份活菌含量達不到《中國獸藥典》規定的要求。為保證疫苗質量，企業通常需要增加100％抗原附加量進行配苗凍干，才能保證疫苗活菌含量在有效期范圍內符合規定。另外，布魯氏菌對熱較敏感，需要較好的冷鏈系統保藏，給邊遠地區儲運和使用帶來困難。因此，研制成功凍干菌存率高，耐熱性能好，2～8℃可長期保存的疫苗尤為必要。

本發明的目的是研制一種耐熱保護劑及其相配套的凍干曲線，制備一種凍干菌存率高，耐熱性能好，并適合2～8℃長期保存的布魯氏菌活疫苗。

發明內容

本發明的技術方案

1一種布魯氏菌活疫苗，其特征是該疫苗含有豬布魯氏菌CVCC70502株，并含有PVP、BSA、甘露醇、海藻糖、199培養基、抗壞血酸、維生素C、硫脲、磷酸氫二鉀及磷酸二氫鉀組成的耐熱凍干保護劑。

2如權利要求1所述一種布魯氏菌活疫苗的生產方法，其特征是將種子液按培養基總量的1％～2％接種于胰蛋白湯或肝湯培養基中，37℃發酵或通氣培養30～36小時，培養過程中根據需要加入適量消泡劑，并根據pH升高情況加入適量滅菌40％葡萄糖以控制pH值；培養結束后，4500r/min離心20min，去上清，菌泥立即加入經過滅菌并預熱至37℃的耐熱凍干保護劑，充分混勻，分裝后經冷凍真空干燥而成，每頭份活菌數不少于1×10¹⁰CFU。