[發明專利]一種α-葡萄糖苷酶抑制劑的制備方法

有效

• 申請號: 201510329350.7
• 申請日: 2015-06-15
• 公開（公告）號: CN104887718B
• 公開（公告）日: 2018-10-19
• 發明（設計）人: 錢國英;丁浩淼;汪財生;顧筱筱;謝琰
• 申請（專利權）人: 浙江萬里學院
• 主分類號: A61K36/03
• 分類號: A61K36/03;A61P3/10
• 代理公司: 寧波誠源專利事務所有限公司 33102
• 代理人: 胡志萍

本發明涉及到一種α?葡萄糖苷酶抑制劑的制備方法，其特征在于包括下述步驟：羊棲菜粉末在循環超聲儀中加入蒸餾水超聲提取，然后離心，取上清液，真空旋轉蒸發濃縮至原體積的五分之一，加入無水乙醇使溶液中靜置、離心，取沉淀物真空下冷凍干燥；將冷凍干燥后的沉淀物溶于水中，配成上樣液，將上樣液注入到D311大孔樹脂中吸附，去除蛋白質和色素，得到第一洗脫液；將得到的第一洗脫液在DEAE?52陰離子交換纖維柱進行吸附洗脫，使用NaCl濃度為0?3M的NaCl?Tris?HCl緩沖液體系等梯度洗脫；在波長為215nm收集到0.5M?1M NaCl下的洗脫液，在3.5KD切向流超濾膜下膜濃縮脫鹽至原體積的五分之一，真空冷凍干燥即得到α?葡萄糖苷酶抑制劑。

技術領域

本發明涉及到一種α-葡萄糖苷酶抑制劑的制備方法。

背景技術

α-葡萄糖苷酶是存在于小腸刷狀緣膜的近腔上皮細胞內的一組水解酶，寡糖經小腸刷狀緣上皮細胞上各種酶的作用生成葡萄糖及其他單糖，經小腸黏膜細胞吸收而被機體利用。研究表明，高血糖狀態不僅降低胰島B胞的功能和胰島素的敏感性，產生胰島素抵抗，而且與糖尿病的慢性并發癥密切相關而在空腹血糖和餐后血糖兩個指標中，餐后血糖水平增加是與血管并發癥相關的一個重要因素。因此，通過降低α-萄糖苷酶活性，延緩或限制碳水化合物在消化道內分解，達到預防和治療這類疾病。α-葡萄糖苷酶抑制劑可抑制葡萄糖苷酶的活性，使葡萄糖的生成和吸收減緩，從而減低餐后血糖峰值，調整血糖水平，減少血糖對胰腺的刺激，提高胰島素的敏感性，保護胰腺的功能，預防并改善并發癥的發生和發展。ɑ-葡萄糖苷酶抑制劑是上世紀70年代研發的治療2型糖尿病的新藥，現已上市的有伏格列波糖(Voglibose)，米格列醇(Miglitol)，阿卡波糖(拜糖平、Acarbose)，經臨床應用，均取得了較好的療效，被認為是2型糖尿病的首選藥和1型糖尿病的胰島素治療的輔助藥物。但長時間使用會出現胃腸脹氣、腹痛、腹瀉等消化道副反應，且制藥成本高。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對現有技術的現狀提供一種抑制效果好且來源于天然植物、副反應少、成本低的α-葡萄糖苷酶抑制劑的制備方法。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案為：該α-葡萄糖苷酶抑制劑的制備方法，其特征在于包括下述步驟：

羊棲菜粉末在循環超聲儀中加入蒸餾水超聲提取，超聲時間為12-18min，超聲溫度為55-65℃，羊棲菜粉末與蒸餾水的比例為1:15-25g/ml，功率900-1100W；然后在離心機中9500-10500rpm下離心，取上清液，55-65℃下真空旋轉蒸發濃縮至原體積的五分之一，加入無水乙醇使溶液中醇量達60-70wt％，靜置22-26小時，在4500-5500rpm下離心12-18min，取沉淀物；

將沉淀物在真空下冷凍干燥,，真空冷凍條件為：真空度125-135Pa，溫度為-85～-75℃，時間為46-50h；

將冷凍干燥后的沉淀物溶于水中，配成濃度為0.9-1.1wt％的水溶液作為上樣液，將上樣液注入到D311大孔樹脂中吸附，去除蛋白質和色素，得到第一洗脫液；上樣液與大孔樹脂用量體積比為1:1；

將得到的第一洗脫液在DEAE-52陰離子交換纖維柱進行吸附洗脫，洗脫所使用的：緩沖體系為NaCl-Tris-HCl緩沖液，pH為7.0-7.2；用含NaCl 0-3M的緩沖液等梯度洗脫DEAE-52陰離子交換纖維柱，流速為1mL/min；在波長為215nm收集到0.5M-1M NaCl下的洗脫液，在3.5KD切向流超濾膜下膜濃縮脫鹽至原體積的五分之一，在125-135Pa、溫度-85～-75℃下真空冷凍干燥46-50h，即得到α-葡萄糖苷酶抑制劑。‘

較好的，DEAE-52陰離子交換纖維柱吸附洗脫NaCl-Tris-HCl緩沖液中，NaCl濃度為1M。該濃度下得到的抑制劑抑制效果更好。