[發明專利]一種竹蟶活性六肽及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201510324588.0
• 申請日: 2015-06-12
• 公開（公告）號: CN105315344B
• 公開（公告）日: 2021-01-29
• 發明（設計）人: 黃芳芳;丁國芳;楊最素;余方苗
• 申請（專利權）人: 浙江海洋學院
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/16;C12P21/06;A61K38/08;A61P35/00;A23L33/18
• 代理公司: 寧波誠源專利事務所有限公司 33102
• 代理人: 袁忠衛;陳蕾

本發明涉及一種竹蟶活性六肽，其氨基酸序列為：Val?Pro?Trp?Asp?Thr?Asp，ESI/MS檢測分子量為731.7Da；通過以下步驟制得：新鮮竹蟶去殼取肉，竹蟶肉洗凈后搗碎，進行組織勻漿，勻漿后調節勻漿液pH值備用；在上述勻漿液中加入堿性蛋白酶進行酶解，獲取酶解樣品，將所得酶解樣品進行超濾、G?25凝膠分離反相高效液相色譜純化，收集洗脫峰組分并進行氨基酸測序，獲得所述竹蟶活性六肽。該竹蟶活性六肽對人前列腺癌PC?3細胞的最大增殖抑制率可達90％以上，可為抗前列腺癌藥物的研究提供理論基礎，該竹蟶活性六肽通過生物酶解方式獲得，原料來源廣泛，成本低，對進一步研究和開發以竹蟶為基礎的藥物和食品、提高竹蟶的經濟價值具有重大意義。

技術領域

本發明涉及生物活性肽領域，尤其涉及一種竹蟶活性六肽及其制備方法和應用。

背景技術

竹蟶又名蟶子王，為海產雙殼軟體動物，體呈延長形，兩殼合抱后呈竹筒狀，故有竹蟶之名。竹蟶貝殼光滑，呈黃褐色，有光澤，殼質脆薄，表面突出，背緣與腹緣平行，后端純圓，呈長方形，生長線明顯，長約11厘米。我國南北沿海均有分布，肉味鮮美，鮮食、干制均可。竹蟶肉味甘咸、性寒，入心、肝、腎經；具有補陰、清熱、除煩，解酒毒等功效；對產后虛陰、煩熱口渴、濕熱水腫、痢疾以及醉酒等有一定治療作用。

活性肽是由兩個或兩個以上的氨基酸以肽鍵相連的化合物，在人體內起重要生理作用，發揮生理功能，如：調節體內的水分、電解質平衡；促進傷口愈合；修復細胞、改善細胞代謝，能起到防癌作用等。活性肽一般通過酶解生物活性材料獲得，鄭惠娜等發現食物蛋白通過蛋白酶酶解方式，可以得到功能多樣的活性多肽(《海洋蛋白酶解制備生物活性肽的研究進展》，鄭惠娜、章超樺、曹文紅，水產科學，2008,27(7)，370)。目前關于蟶類活性肽的研究主要集中于縊蟶，如：雷曉凌等對縊蟶肉的酶解條件進行研究，發現提取得到的糖胺聚糖對體外培養的HL-60細胞均有一定抑制作用，且隨著用量增加抑制作用增強(《縊蟶糖胺聚糖的提取分離及其體外抗腫瘤活性的初步研究》，雷曉凌、吳紅棉、范秀萍等，藥物生物技術，2004,11(3)：146-149)；張永娟等研究發現提取的縊蟶多肽能促進小鼠胸腺和脾臟發育及遲發型變態反應的發生，提高小鼠碳廓清能力及血清溶血素水平(《縊蟶多肽的免疫調節及抗氧化作用》，張永娟、鄭惠娜，時珍國醫國藥，2011,22(5)：1076-1077)。

竹蟶與縊蟶外形不同，食用時風味也稍有不同，目前關于竹蟶酶解多肽的研究還未見報道，因此對竹蟶酶解多肽進行研究，對進一步研究和開發以竹蟶酶解多肽多基礎的功能性食品和藥物，提高竹蟶的經濟價值具有重大意義。

發明內容

本發明所要解決的第一個技術問題是針對現有技術而提供一種具有抗腫瘤活性的竹蟶活性六肽。

本發明所要解決的第二個技術問題是針對現有技術而提供一種上述竹蟶活性六肽的制備方法。

本發明所要解決的第三個技術問題是針對現有技術而提供一種上述竹蟶活性六肽的應用。

本發明解決上述第一個技術問題所采用的技術方案為：一種竹蟶活性六肽，其氨基酸序列為：Val-Pro-Trp-Asp-Thr-Asp，ESI/MS檢測分子量為731.7Da。

本發明解決上述第二個技術問題所采用的技術方案為：上述竹蟶活性六肽的制備方法，包括以下步驟：

(1)新鮮竹蟶去殼取肉，竹蟶肉洗凈后搗碎，按料液比1:1～3加水進行組織勻漿，勻漿后調節勻漿液pH值為8～10.4備用；

(2)在上述勻漿液中加入堿性蛋白酶進行酶解，獲取酶解樣品，酶解溫度為35～50℃，加酶量為300～1200U/g竹蟶肉，酶解時間為2～8h，酶解完成后于95～100℃、10～15min進行滅酶；

(3)將上述酶解樣品過5KD、8KD超濾膜進行超濾，分別收集分子量大于8KD、分子量為8～5KD以及分子量小于5KD的酶解液組進行冷凍干燥；