[發明專利]一種電化學檢測的細胞前處理方法

有效

• 申請號: 201510324323.0
• 申請日: 2015-06-12
• 公開（公告）號: CN105021671B
• 公開（公告）日: 2018-03-09
• 發明（設計）人: 崔繼文;畢勝;野秀玉;李錦蓮;劉繼光;武冬梅
• 申請（專利權）人: 佳木斯大學
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙)11465
• 代理人: 李冉

技術領域

本發明涉及一種電化學檢測的細胞前處理方法。

背景技術

體外細胞電化學試驗方法是近幾年發展起來的用于細胞活性檢測的試驗方法，相較于傳統方法，如MTT法、流式細胞儀法等，具有簡單、快速、靈敏、低成本等特點，可以細胞活性為指標來評價抗癌藥物敏感性、環境致癌物毒性及生物材料的生物相容性，該方法目前主要通過檢測細胞內電活性物質伏安響應的變化來反映細胞活性的變化，因此細胞內電活性物質的有效釋放是完成該項測試的關鍵性因素，而目前用來實現細胞內電活性物質釋放的細胞前處理技術是細胞加熱裂解法和細胞原位低滲裂解法，即在進行電化學檢測之前，首先把細胞放置于一定溫度的裝置中，使其加熱失活，從而釋放出細胞內電活性物質，該方法實現了細胞中電活性物質在檢測裝置中的有效釋放，可以保證細胞電化學方法檢測到細胞內電活性物質。傳統細胞加熱裂解法中細胞生存環境為高滲PBS溶液，如果采用低滲溶液如雙蒸水代替高滲PBS溶液，使細胞周圍環境為低滲溶液，則可能會導致細胞大量吸水脹大，從而加強細胞裂解程度，這樣就可以實現細胞原位低滲裂解。

現有細胞前處理技術雖然在一定程度上實現了細胞內電活性物質的釋放，從而完成細胞的電化學檢測，以其測定結果表達細胞活性的變化，但該方法只是實現了在細胞膜表面打開通道來釋放電活性物質，電活性物質釋放不夠完全，從而電化學信號較弱，無法用其來真實地反映細胞活性的變化。

發明內容

本發明是為了解決現有細胞前處理技術釋放電活性物質不夠完全，從而無法真實地反映細胞活性變化的問題，提供一種電化學檢測的細胞前處理方法。

本發明一種電化學檢測的細胞前處理方法為細胞原位復合裂解法，具體方法為：將待檢測細胞接種于培養皿中，置于37℃、CO₂體積濃度為5％的培養箱中培養24h，然后去除培養基，加入低滲裂解液，調整待檢測細胞濃度為5×10⁴～5×10⁸cells·mL^-1，然后在30～70℃水浴條件下，裂解30～60min，即完成。

本發明在細胞加熱裂解法的基礎上復合低滲裂解法，即用低滲溶液如雙蒸水代替高滲PBS溶液，使細胞周圍環境為低滲溶液，同時輔助加熱，實現雙重效果疊加，導致細胞大量吸水脹大，從而加強細胞裂解程度，直至細胞膜最終破裂，從而實現細胞原位復合裂解，完全釋放出細胞內全部電活性物質，不僅有效增強了電化學信號，而且真實地反映了細胞內電活性物質的實際含量，提高了電化學檢測信號的敏感度，使其更有利于細胞活性檢測，并且能夠真實地反映細胞活性的變化，提高了細胞電化學試驗方法的準確性，有望在實際樣本檢測中獲得更加廣泛的應用。

附圖說明

圖1為試驗1試驗組、對照組1和對照組2的MCF-7細胞三種裂解方式對比的電化學圖；其中a為細胞原位復合裂解，b為細胞原位加熱裂解，c為細胞原位低滲裂解；

圖2為試驗1的試驗組細胞裂解產物的顯微鏡圖；

圖3為試驗1的對照組1細胞裂解產物的顯微鏡圖；

圖4為試驗1的對照組2細胞裂解產物的顯微鏡圖。

具體實施方式

具體實施方式一：本實施方式一種電化學檢測的細胞前處理方法為細胞原位復合裂解法，具體方法為：將待檢測細胞接種于培養皿中，置于37℃、CO₂體積濃度為5％的培養箱中培養24h，然后去除培養基，加入低滲裂解液，調整待檢測細胞濃度為5×10⁴～5×10⁸cells·mL^-1，然后在30～70℃水浴條件下，裂解30～60min，即完成。

本具體實施方式在細胞加熱裂解法的基礎上復合低滲裂解法，即用低滲溶液如雙蒸水代替高滲PBS溶液，使細胞周圍環境為低滲溶液，同時輔助加熱，實現雙重效果疊加，導致細胞大量吸水脹大，從而加強細胞裂解程度，直至細胞膜最終破裂，從而實現細胞原位復合裂解，完全釋放出細胞內全部電活性物質，不僅有效增強了電化學信號，而且真實地反映了細胞內電活性物質的實際含量，提高了電化學檢測信號的敏感度，使其更有利于細胞活性檢測，并且能夠真實地反映細胞活性的變化，提高了細胞電化學試驗方法的準確性，有望在實際樣本檢測中獲得更加廣泛的應用。

具體實施方式二：本實施方式與具體實施方式一不同的是：所述的培養基為DMEM高糖培養基。其他步驟和參數與具體實施方式一相同。