[發明專利]檢測樣品中奎尼酸的方法、試劑盒及其用途

有效

• 申請號: 201510295614.1
• 申請日: 2015-06-03
• 公開（公告）號: CN104897836B
• 公開（公告）日: 2017-03-15
• 發明（設計）人: 鄧其馨;劉澤春;黃華發;黃朝章;周培琛;方鉦中;蘇明亮
• 申請（專利權）人: 福建中煙工業有限責任公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所11038
• 代理人: 劉海羅

技術領域

本發明屬于分析技術領域，涉及一種檢測樣品中奎尼酸的方法、試劑盒及其用途。

背景技術

奎尼酸(quinic?acid，QA)是植物進行有氧呼吸過程中，經莽草酸途徑形成的一種環狀、多羥基及有光學活性的天然酚酸類化合物，又名1,3,4,5-四羥基環己烷-1-羧酸。奎尼酸的分子式為C₆H₇(OH)₄COOH，結構式如式Ⅰ所示。

奎尼酸廣泛存在于各類植物中，例如煙草、金雞納樹皮、胡蘿卜葉、蘋果、梨和咖啡等，而且，少數真菌和細菌中也存在奎尼酸。奎尼酸及其衍生物常被作為食品抗氧化劑使用；奎尼酸的咖啡酰類衍生物在抗病毒、治療心血管疾病等方面得到較多關注和應用。因此，奎尼酸是提取價值極高的精細化工產品和醫藥中間體。

此外，奎尼酸在煙草中的含量較高，在0.05％-1％之間。奎尼酸對人體具有刺激性，且是有害成分酚類化合物的前體物，因此奎尼酸會對煙草感官品質產生不良影響，且會損害吸煙者的健康，亟需控制奎尼酸在煙草中的含量。

通常采用液相色譜法分析奎尼酸的含量，該法采用二極管陣列檢測器。但該方法的檢測時間較長，不利于快速檢測。

目前尚無快速檢測樣品尤其是煙草及煙草制品中奎尼酸的方法。

發明內容

本發明人得到了一種快速檢測樣品中奎尼酸的方法，尤其適用于對煙草制品進行檢測。該方法快速準確、靈敏度高、選擇性好、重現性好。而且，發明人驚奇地發現以乙酸銨水溶液提取樣品中的奎尼酸，前處理步驟簡單、快速。此外，發明人還采用液相色譜-質譜聯用法對奎尼酸進行快速分析檢測。

本發明第一方面涉及一種檢測樣品中奎尼酸的方法，包括如下步驟：用乙酸銨水溶液浸潤樣品，得到提取液。

所述浸潤指乙酸銨水溶液與樣品發生接觸時，液體附著在樣品表面或滲透到樣品內部的現象。具體地，浸潤時，乙酸銨水溶液液面至少為樣品高度的1/3或至少為樣品高度的1/2，優選，乙酸銨水溶液完全浸沒樣品。

本發明第一方面任一項的方法中，所述樣品為煙草或煙草制品。

發明人發現，提取溶劑的選擇對奎尼酸分析有顯著影響，乙酸銨水溶液能將樣品中的奎尼酸快速提取出來，提取率高且方法簡單。而采用其他的磷酸鈉緩沖溶液(NaH₂PO₄-Na₂HPO₄)、磷酸鉀緩沖溶液(K₂HPO₄-KH₂PO₄)等無法對樣品中的奎尼酸進行有效的提取分析。

根據本發明第一方面的方法，所述檢測為定量檢測。

本發明第一方面任一項的方法中，所述乙酸銨水溶液的濃度為0.09-0.15mol/L，具體為0.1-0.15mol/L或0.12-0.15mol/L，優選為0.1mol/L。

乙酸銨水溶液的濃度為0.09-0.15mol/L，可基本完全提取出樣品中的奎尼酸。

本發明第一方面任一項的方法中，向每克樣品中添加乙酸銨水溶液的量為250-1000mL，具體為250-500mL，更具體為250mL、300mL、500mL、750mL或1000mL，優選為500mL。

發明人發現，乙酸銨水溶液添加量過大時，信號微弱，容易受基線噪音的影響；添加量過小時，對于奎尼酸含量高的樣品，容易出現信號值過飽和、測定不準確的問題。將乙酸銨水溶液添加量控制在250-1000mL/g，尤其是500mL/g，可以保有正常信號值，使測量準確，同時合適的乙酸銨水溶液添加量能夠使奎尼酸被均勻提取出來。

本發明第一方面任一項的方法中，所述浸潤在超聲下進行；具體地，超聲功率為最大功率的40％；更具體地，浸潤時間≥10min，進一步具體地，浸潤時間≥30min、≥40min或≥50min，優選為30min。

本發明第一方面任一項的方法中，浸潤溫度為30-60℃，具體為30℃、40℃、50℃或60℃，優選40℃。

本發明第一方面任一項的方法中，還包括將提取液進行過濾的步驟；具體地，以水相濾膜過濾提取液；更具體地，所述水相濾膜的孔徑為0.22μm。

本發明第一方面任一項的方法中，還包括用液相色譜-質譜分析提取液的步驟。

根據本發明任一的方法，液相色譜條件為如下(1)-(6)中的任意一項或者多項：

(1)色譜柱為菲羅門C₁₈液相色譜柱；

(2)進樣量為5μL；