[發(fā)明專利]miR?2400顯著促進(jìn)牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖的生物功能

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510292005.0
• 申請(qǐng)日: 2015-06-01
• 公開（公告）號(hào): CN104877960B
• 公開（公告）日: 2017-09-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 嚴(yán)云勤;張偉偉;佟慧麗;李樹峰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/077
• 分類號(hào): C12N5/077
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.miR-2400用于促進(jìn)牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖，其特征在于：通過(guò)對(duì)牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞進(jìn)行體外分離培養(yǎng)，采用含2％馬血清的分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞分化，在誘導(dǎo)分化3天后，熒光顯微鏡下觀察到MHC和Desmin在牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中的表達(dá)情況；牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞分化后，MHC和Desmin在細(xì)胞具有陽(yáng)性表達(dá)信號(hào)，從而證明本研究分離培養(yǎng)的為牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞，且具有分化為肌管的能力；在牛的骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞分化過(guò)程中，采用莖環(huán)熒光定量RT-PCR檢測(cè)miR-2400的表達(dá)量，采用EdU、PCNA免疫熒光、CCK-8以及CCND2和CDK6表達(dá)量的熒光定量RT-PCR檢測(cè)miR-2400對(duì)骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖的影響；在牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞分化過(guò)程中，隨著分化天數(shù)和分化程度的增加，miR-2400的表達(dá)量明顯下降；EdU結(jié)果為miR-2400過(guò)表達(dá)后，牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖率明顯提高，轉(zhuǎn)miR-2400抑制劑后，牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖率明顯降低；PCNA免疫熒光結(jié)果為miR-2400過(guò)表達(dá)后，牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖率明顯提高，轉(zhuǎn)miR-2400抑制劑后，牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖率明顯降低；CCK-8檢測(cè)結(jié)果為miR-2400過(guò)表達(dá)后，牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖率明顯提高，轉(zhuǎn)miR-2400抑制劑后，牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖率明顯降低；CCND2和CDK6表達(dá)量的熒光定量RT-PCR結(jié)果為miR-2400過(guò)表達(dá)后，與增殖相關(guān)的基因CCND2和CDK6表達(dá)量明顯上升，轉(zhuǎn)miR-2400抑制劑后與增殖相關(guān)的基因CCND2和CDK6表達(dá)量明顯下降；以上所有結(jié)果均表明miR-2400在調(diào)節(jié)牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖和分化過(guò)程中具有一定的作用，能夠顯著促進(jìn)牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖。