[發明專利]一種副球菌及其菌劑和制備方法與應用

有效

• 申請號: 201510291837.0
• 申請日: 2015-06-01
• 公開（公告）號: CN104877916B
• 公開（公告）日: 2017-11-17
• 發明（設計）人: 段玉琪;夏振遠;楊宇虹;徐照麗;張立猛;張翠萍
• 申請（專利權）人: 云南省煙草農業科學研究院;云南省煙草公司玉溪市公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C05G3/00;C12R1/01
• 代理公司: 昆明知道專利事務所(特殊普通合伙企業)53116
• 代理人: 姜開俠,謝喬良

技術領域

本發明屬于微生物技術領域，具體涉及一種副球菌及其菌劑和制備方法與應用。

背景技術

現代農業生產中隨著化肥的大量施用，農作物的產值、產量都有了很大的提高，同時也導致了土壤有機質降低、土壤板結、土地生產力下降等一系列問題。土壤微生物具有促進土壤養分轉化、活化土壤養分、增加養分供應的作用。土壤微生物參與土壤養分轉化的各種生物化學反應，與土壤養分的供應和損失密切相關。在土壤中，有機質礦化與腐殖化、氮素的硝化和反硝化、含磷鉀礦物的有效化等過程均有土壤微生物的參與，土壤微生物制約著土壤氮、磷、鉀營養元素的供應和生物有效性，影響煙株的產、質量。而土壤養分大部分以無效態存在，氮大部分為有機氮，含磷和含鉀礦物占土壤全磷鉀的95%以上。有機氮在微生物的作用下礦化為無機氮，供給植物營養；土壤中的溶磷解鉀微生物能分泌甲酸、乙酸、草酸、檸檬酸、丁二酸等，溶解含磷和含鉀礦物，釋放磷鉀，提高它們的生物有效性，改善作物營養。在土壤中，存在共生固氮菌、自生固氮菌和聯合固氮菌等多種固氮微生物，通過不同方式固定空氣中的氮，增加土壤的氮素養分，供給植物營養之需要。而一種微生物具有多種作用的菌劑未見相關報道。

發明內容

本發明第一目的在于提供一種副球菌，第二目的在于提供一種以所述副球菌作為活性成分的菌劑，第三目的在于提供所述以副球菌作為活性成分的菌劑制備方法，第四目的在于提供所述菌劑的應用。

本發明第一目的是這樣實現的，所述的副球菌為副球菌屬（Paracoccus limosus）A36，保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（CGMCC），保藏日：2014年11月21日，保藏編號：CGMCC No. 10032；所述副球菌屬于細菌界，變形菌門，α-變形菌綱，紅桿菌目，紅桿菌科，副球菌屬。

——副球菌屬（Paracoccus limosus）A36的獲得與鑒定

（1）副球菌屬（Paracoccus limosus）A36的獲得與鑒定

本發明所述的副球菌，是采用硅酸鹽細菌培養基從玉溪市紅塔區大營鎮黃官煙田的紫色土壤中分離出來，在硅酸鹽細菌培養基上選擇菌落透明、發亮、粘性較大的菌落再轉接到無機磷細菌培養基上，出現溶磷圈后，記錄菌落直徑和溶磷圈大小，取溶磷圈較大的菌重新純化培養，再挑到40%的滅菌干油管中4℃保存備用。

所用培養基配方：

1、硅酸鹽細菌培養基：

蔗糖5g、土壤礦物 1.0g、MgSO₄·7H₂O 0.5g、CaCO₃ 0.1g、Na₂HPO₄ 2.0g、FeCl₃（1%）0.2ml、瓊脂 20g、蒸餾水1000ml、pH 7.0~7.5。

2、無機磷細菌培養基：

葡萄糖 10 g、(NH₄)₂SO₄ 0.5 g、NaCl 0.3 g、KCl 0.3 g、MgSO₄·7H₂O 0.3g、FeSO₄·7H₂O 0.03g、MnSO₄·4H₂O 0.03 g、CaCO₃ 5 g、Ca₃(PO₄)₂ 10g、瓊脂 18-20g、蒸餾水1000ml、pH 7.0~7.5。

對上述分離的菌株A36，

通過常規方法進行生物學和生理生化特性檢測與分子生物學方法鑒定。分子鑒定方法如下：細菌基因組DNA的提取用TaKaRa MiniBEST Bacterial Genomic DNA Extraction Kit Ver.2.0，方法參見試劑盒說明書。PCR擴增選用引物F27/R1492，常規條件擴增，擴增產物委托上海英駿生物技術有限公司進行序列測定。

該菌呈桿狀，無芽孢，革蘭氏染色陰性，葡萄糖發酵陰性，接觸酶陽性，氧化酶陽性，甲基紅試驗陰性，VP試驗陰性，硝酸鹽還原陽性.。

16S rDNA序列分析：通過序列比對和生理生化特性將A36菌株鑒定為副球菌屬（Paracoccus limosus）。

（2）副球菌屬（Paracoccus limosus）A36的保藏