[發明專利]特異性結合LMP2A胞外區第二位及第五位串聯表位融合蛋白的單克隆抗體及應用

在審

• 申請號: 201510290657.0
• 申請日: 2015-05-29
• 公開（公告）號: CN105153301A
• 公開（公告）日: 2015-12-16
• 發明（設計）人: 徐鑫;馮振卿;朱進
• 申請（專利權）人: 南京醫科大學
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/574
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 唐循文

技術領域

本發明涉及生物醫學和免疫靶向診療領域，具體涉及抗EBV潛伏膜蛋白LMP2A單克隆抗體的制備方法及其應用。

背景技術

鼻咽癌是我國常見的惡性腫瘤之一，發生于鼻咽腔或者上咽喉部，發病率高，好發于中國華南地區。16～25歲前后與45～54歲是鼻咽癌好發的兩個年齡段，發病對象主要為中青年。其發病原因與EBV感染密切相關，鼻咽癌病理檢查多為低分化型鱗癌，目前治療方案首選放療、化療，但是治療后五年生存率約為50%～60%，易復發和轉移，尤其復發后病人對放化療的敏感性大大降低。因此分子靶向治療為鼻咽癌的治療提供了更好的思路與方案。

EB病毒（Epstein-Barrvirus，EBV）屬人類γ皰疹病毒，在全球廣泛分布，約95%以上的成人所攜帶，呈潛伏感染狀態，與鼻咽癌、Burkitt淋巴瘤等多種腫瘤的發生、發展相關。在EBV潛伏感染的細胞中，表達十多種EBV基因產物，包括EBV核抗原(EBnuclearantigen，EBNA)1、2、3A、3B、3C和LP，潛伏膜蛋白(latentmembraneprotein，LMP)1和2A、2B，EBV編碼的小RNA(EBER)1和2以及BamHI的轉錄產物。近年許多關于LMP2A的研究報道指出，EBV潛伏感染的B細胞中均有LMP2A的表達，鼻咽癌和其他EBV相關惡性腫瘤中可持續檢測到LMP2A的轉錄表達產物（mRNA），LMP2A可在沒有BCR提供信號的情況下促進B細胞的增殖和存活，并且LMP2A是鼻咽癌、淋巴瘤等腫瘤細胞穩定表達的EBV保守抗原，在維持病毒的潛伏感染狀態和細胞轉化過程中發揮重要作用，并參與調節跨膜信號的轉導。目前認為LMP2A是鼻咽癌等EBV相關惡性腫瘤免疫治療的理想靶抗原。

由于迄今為止，對容易發生轉移的鼻咽癌沒有找到一種行之有效的治療方案，盡管多數患者采用放化療等綜合治療后病情有所好轉，但是5年后生存率仍然很不理想，并且極易復發與轉移，尤其是復發后的病人對放化療的敏感性大大降低。然而，鼻咽癌與其他頭頸腫瘤最顯著的區別在于與EBV高度相關，高轉移性。幾乎所有的鼻咽癌患者以及癌細胞都攜帶LMP2AmRNA，50%以上的鼻咽癌腫瘤組織切片中檢測到LMP2A蛋白的表達。

發明內容

解決的技術問題：本發明提供一種特異性結合LMP2A胞外區第二位及第五位串聯表位融合蛋白的單克隆抗體及應用，是一種能夠特異性識別LMP2A抗原的鼠源性單克隆抗體，該抗體對LMP2A蛋白的選擇性強。

技術方案：一種特異性結合LMP2A胞外區第二位及第五位串聯表位融合蛋白的單克隆抗體，由保藏編號為CCTCCNO:C201504的雜交瘤細胞株產生，保藏日期為2015年1月29日，保藏單位名稱為中國典型培養物保藏中心，地址為中國.武漢.武漢大學。

一種抗LMP2A雜交瘤細胞株5C12C4A6，其保藏編號為CCTCCNO:C201504，保藏日期為2015年1月29日，保藏單位名稱為中國典型培養物保藏中心，地址為中國.武漢.武漢大學。

所述的單克隆抗體在制備用于檢測LMP2A胞外區第二位及第五位串聯表位融合蛋白的免疫檢測工具中的應用。

所述免疫檢測工具為試劑盒、芯片或試紙。

所述的單克隆抗體在制備用于診斷LMP2A胞外區第二位及第五位串聯表位融合蛋白相關性腫瘤的病理診斷試劑盒中的應用。

所述相關腫瘤為鼻咽癌、淋巴瘤、胃癌或T細胞淋巴瘤。

一種免疫組化試劑盒，包括上述的單克隆抗體。

有益效果：本發明的檢測方法是利用單克隆抗體專一性，特異性強，靈敏度高的特征，基于研究證實LMP2A在鼻咽癌的轉移和復發中的重要作用的基礎上。運用LMP2A胞外區第二位第五位表位串聯融合蛋白免疫小鼠，制備出單克隆抗體，可以特異性靶向結合鼻咽癌中LMP2A蛋白，結合病理診斷，可以預測病人的病情發展及預后，更重要的是將LMP2A作為靶點，在鼻咽癌治療方面起到重要作用。同時，基于LMP2A在其它EBV相關腫瘤中的作用，例如Hodgkin淋巴瘤、胃癌、T細胞淋巴瘤等，對此類EBV相關腫瘤的檢測，診斷以及治療發揮一定作用。利用單克隆抗體特異性中和LMP2A從而抑制了腫瘤細胞的增殖，逆轉其誘導的EMT轉變，抑制了腫瘤的轉移；利用單克隆抗體介導的靶向特性，連接化療藥物以及放療增敏劑，達到了靶向治療的目的。

附圖說明

圖1為純化后的抗LMP2A單克隆抗體的SDS-PAGE分析結果。