[發(fā)明專利]一種鐵皮石斛化學消毒組培方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510274007.7
• 申請日: 2015-05-26
• 公開（公告）號: CN104885940B
• 公開（公告）日: 2017-04-26
• 發(fā)明（設計）人: 高世武;林慶良;袁照年;許莉萍;陳曉英;郭晉隆;闕友雄
• 申請（專利權）人: 福建農(nóng)林大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 福州市眾韜專利代理事務所(普通合伙)35220
• 代理人: 陳智雄,黃秀婷

技術領域

本發(fā)明涉及一種植物組織培養(yǎng)方法，具體涉及一種鐵皮石斛化學消毒組培方法，屬生物技術領域。

背景技術

鐵皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)為蘭科氣生草本植物，又名黑節(jié)草，為石斛之極品，具有獨特的藥用價值，鐵皮石斛生長環(huán)境特殊及其自我繁殖能力較為低下，加之人們的過度采挖，造成其野生資源日趨減少甚至瀕臨絕種，因此通過組織培養(yǎng)技術,對鐵皮石斛進行集約化人工栽培,是保護和利用鐵皮石斛資源的必要途徑。建立高效的鐵皮石斛組織快繁體系成為解決種苗問題，推進鐵皮石斛良性發(fā)展的有效途徑。

采用鐵皮石斛的莖段進行叢生芽的誘導培養(yǎng)，具有取材易、繁殖系數(shù)高、遺傳變異率低、繁殖速度快等優(yōu)點，能在較短時間內(nèi)為商業(yè)栽培提供大量標準化優(yōu)良種苗。實現(xiàn)鐵皮石斛的商業(yè)栽培不但為種植者創(chuàng)造豐厚的經(jīng)濟效益，還一定程度上對保護野生資源和生態(tài)環(huán)境具有重要意義。

鐵皮石斛組織培養(yǎng)，一方面可以擴大其繁殖系數(shù)，從而實現(xiàn)規(guī)模化繁殖；另一方面，可以在保存其原有的優(yōu)良性狀的基礎上，實現(xiàn)鐵皮石斛的種質(zhì)資源保存和轉基因研究等。鐵皮石斛組織培養(yǎng)的成本主要包括組培苗生產(chǎn)所需的培養(yǎng)基、設施設備、供電成本、耗材和人工成本。常規(guī)的鐵皮石斛組織培養(yǎng)方法要求外植體接種在高溫高壓滅菌后的無菌培養(yǎng)基中才能正常生長，耗能大，人工操作成本高。如果能通過化學消毒的方法來改造培養(yǎng)基，使培養(yǎng)基在不需要進行高溫高壓滅菌，就能夠獲得鐵皮石斛的正常生長。這樣，一方面可以降低鐵皮石斛組織培養(yǎng)對設施設備的要求，尤其不需要高溫高壓滅菌所需配置的高壓鍋設備，縮減了投資成本，電能消耗也將大幅度降低；另一方面，采用這種培養(yǎng)基開展鐵皮石斛組織培養(yǎng)，組培環(huán)節(jié)大為簡化，人工操作的速度大幅提高，從而降低了人工成本。此外，由于改造后的培養(yǎng)基自身具有殺菌、抗菌或抑菌作用，能有效控制組織培養(yǎng)過程中的污染問題，又不會對鐵皮石斛生長產(chǎn)生毒害或抑制，即不影響鐵皮石斛的正常生長，從根本上簡化了鐵皮石斛組織培養(yǎng)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種鐵皮石斛化學消毒組培方法。

本發(fā)明的目的是通過以下技術方案實現(xiàn)的。

本發(fā)明的一種鐵皮石斛化學消毒組培方法，包括培養(yǎng)容器消毒、培養(yǎng)基配制、誘導培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和瓶苗移栽，其特征在于：

1.培養(yǎng)容器消毒：將培養(yǎng)瓶瓶蓋及接種用的不銹鋼盤在100mg/L次氯酸鈉+10mg/L乳酸鏈球菌素+100mg/L丙酸鈣的水溶液中浸泡不少于10h，保存?zhèn)溆茫?/p>

2.培養(yǎng)基配制：誘導培養(yǎng)基為MS+1～3mg/L 6-BA+0.1～1.0mg/L NAA+40～100mg/L次氯酸鈉+1～5mg/L乳酸鏈球菌素+10～50mg/L丙酸鈣+20g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8；增殖培養(yǎng)基為：MS+1.0～2mg/L 6-BA+0.1～1.0mg/L NAA+40～100mg/L次氯酸鈉+1～5mg/L乳酸鏈球菌素+10～50mg/L丙酸鈣+20g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8；壯苗培養(yǎng)基為MS+0.1～0.5mg/L 6-BA+0.5～1.0mg/L NAA+40～100mg/L次氯酸鈉+1～5mg/L乳酸鏈球菌素+10～50mg/L丙酸鈣+20g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8；生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.5～1.5mg/L NAA+40～100mg/L次氯酸鈉+1～5mg/L乳酸鏈球菌素+10～50mg/L丙酸鈣+20g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8；所述MS培養(yǎng)基為1962年，Murashige和Skoog公開的MS培養(yǎng)基；所述6-BA，指6-芐氨基嘌吟；所述NAA，指〆-萘乙酸；配制培養(yǎng)基時，先稱各培養(yǎng)基配方中蔗糖和瓊脂粉，加培養(yǎng)基總體積1/2的自來水，加熱至瓊脂粉完全溶解，再按各培養(yǎng)基配方配齊其他原料后，定容、然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl調(diào)pH值至5.8，分裝到消毒過的培養(yǎng)容器中，封口，冷卻凝固后備用；

3.誘導培養(yǎng)：取健壯的鐵皮石斛莖段，剪除葉、根，洗凈后在無菌操作臺上切成帶有莖節(jié)的1～2cm小段，于體積比為75％酒精中浸20s，然后在重量比為0.1％升汞溶液中消毒10～20min，取出用無菌水沖洗3次后，接種于誘導培養(yǎng)基上，培養(yǎng)40d后出現(xiàn)黃綠色斑點，60d后斑點變綠出現(xiàn)小芽；培養(yǎng)室溫度為26℃，光照12h，光照強度為1400lx；

4.增殖培養(yǎng)：將誘導培養(yǎng)的小芽轉入增殖培養(yǎng)基中，每30d轉接一次，大量增殖叢生芽；培養(yǎng)室溫度為26℃，光照12h，光照強度為1400lx；