[發明專利]一種DNA聚合酶錯配率的檢測方法有效
| 申請號： | 201510271941.3 | 申請日： | 2015-05-25 |
| 公開（公告）號： | CN104894221B | 公開（公告）日： | 2017-08-25 |
| 發明（設計）人： | 耿亮;賀翠婷;辛文;馬靜 | 申請（專利權）人： | 北京全式金生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/48 | 分類號： | C12Q1/48 |
| 代理公司： | 北京正理專利代理有限公司11257 | 代理人： | 張文祎 |
| 地址： | 100000 北京市海淀區西*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 dna 聚合 酶錯配率 檢測 方法 | ||
1.一種DNA聚合酶錯配率的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：
1)制備含有突變型ccdB基因的質粒，其中所述突變型ccdB基因是通過同義突變在野生型ccdB基因內引入內切酶的酶切位點，所述酶切位點在所述質粒上是唯一的，所述質粒不表達抗ccdB蛋白毒性的基因；
2)內切酶酶切步驟1)引入內切酶的酶切位點，獲得線性化質粒；
3)擴增LacZα基因；
4)將步驟3)獲得的LacZα基因連接到所述線性化質粒，獲得連接產物；
5)轉化所述連接產物至宿主菌，并在培養基上進行培養；
6)計算錯配率。
2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：所述LacZα基因的DNA序列如序列表SEQ ID No.1所示。
3.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：步驟4)所述LacZα基因連接到所述線性化質粒的方法為基因重組或通過DNA連接酶連接。
4.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：所述宿主菌為對ccdB蛋白無抗性的大腸桿菌。
5.根據權利要求4所述的檢測方法，其特征在于：所述宿主菌為DH5α、Top10或Trans1-T1。
6.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：所述培養基為固體培養基。
7.根據權利要求1或6所述的檢測方法，其特征在于：所述培養基含有X-gal和IPTG。
8.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述錯配率的計算方法為：
。
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