[發明專利]一種快速獲得日本結縷草組培苗的方法

有效

• 申請號: 201510271876.4
• 申請日: 2015-05-25
• 公開（公告）號: CN104885938B
• 公開（公告）日: 2017-04-19
• 發明（設計）人: 韓烈保;謝琦;袁建波;張胤冰;樊波
• 申請（專利權）人: 北京林業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司11002
• 代理人: 王文君,莫舒穎

技術領域

本發明屬于植物的組織培養領域，具體涉及一種快速獲得日本結縷草組培苗的方法。

背景技術

結縷草為多年生草本植物，隸屬于禾本科虎耳草亞科。一般認為有11個種及部分變種，而作為草坪草種質資源被研究利用的有5個種。其中的日本結縷草是重要的草坪草，它很多的優良特性，如適應性廣、抗旱性強、耐磨耐踐踏、耐熱耐鹽堿等，使得它被廣泛運用于城市運動場、城市綠化、公路護坡及水土保持。

然而綠色期短的缺點限制了日本結縷草進一步的擴大應用。并且結縷草為四倍體植株，授粉方式為雌雄同株異花型。傳統育種的方式很難改良綠色期短的性狀，并且也難于獲得品系較純，遺傳背景一直的日本結縷草種子。應用轉基因的技術篩選培育符合生產需求的品種就有著巨大的優勢。

應用轉基因手段改良物種的基礎是建立高效優質的再生體系，在這方面已經有很多的學者進行了研究。Al-khayri等用日本結縷草成熟胚誘導了愈傷組織，從而得到再生植株；Inokuma通過培養日本結縷草懸浮細胞系，進而純化得到原生質體再生株系；Noh等人以結縷草的幼穗、莖尖為外植體材料誘導愈傷組織，并獲得了再生植株。但這些辦法的周期過長，誘導出胚性愈傷組織通常需要3個月以上的時間，再由胚性愈傷組織長成植株可能要半年左右的時間，這增大了分子育種工作者篩選和選育優良植物品系的周期。Yaxin Ge等人用日本結縷草的匍匐莖做的再生體系，大大縮短了時間，在報道中，2月左右的時間就能獲得轉基因植株。但植物體內的內生菌難以消除，從而大大影響了基因轉化的效率。本課題組構建的再生體系，能保證快速獲得再生植株(50天左右)，也同時避免了染菌的問題。

發明內容

為加快日本結縷草組培苗的建成過程，提高生產效益，本發明的目的在于提供一種快速獲得日本結縷草組培苗的方法。

本發明提供的快速獲得日本結縷草組培苗的方法，包括如下步驟：

1)將滅菌的日本結縷草種子以水浸種3天；

2)浸種后的種子吹干至表面發白，以剛沒過種子的水培養至萌發出1-2mm的芽；

3)將萌芽后的種子接種到固體MS(Murashige and Skoog)培養基上，培養至幼苗地上部高3cm，此時幼苗葉鞘底部出現表面粗糙的節點；

4)剝去幼苗上的種皮，沿節點上沿切斷幼苗，注意保留節點，去除節點以上的莖葉，將余下的植株放到ZJ-SM培養基上，培養至莖端長出芽；

5)去除莖端長出的芽，將植株放回ZJ-SM培養基上繼續培養至根端長出芽；

6)將根端長出的芽切下放到固體1/2MS培養基上培養至長出5cm長的根，得到完整的植株；

7)將完整的植株煉苗后移植，得到日本結縷草組培苗。

其中，所述的水優選為無菌水。

其中，步驟1)所述滅菌的方法為：將種子加入滅菌液后攪拌40min，用水漂洗3-5次后去除表面水分。

所述去除表面水分，為吹干或用無菌濾紙吸干水分。

所述滅菌液為Tween-20含量為2.500ml/L、次氯酸鈉原液含量為250ml/L的水溶液。

其中，所述ZJ-SM培養基為含激動素(kinetin)的濃度為1.0-8.0μmol/L、含2,4-D的濃度為0.1μmol/L、蔗糖質量百分含量為2％、植物凝膠的含量為0.3％(w/v)的固體MS培養基。

所述激動素的濃度優選為4.0-6.0μmol/L，最優選為4.0μmol/L。

其中，步驟2)所述培養至萌發出1-2mm的芽，所需時間為3天。

其中，步驟3)所述培養至幼苗株高3cm，所需時間為12天。

其中，步驟4)所述培養至莖端長出芽，所需的時間為4天。

其中，步驟5)所述培養至根端長出芽，所需的時間為15天。

其中，步驟6)所述培養至長出根，所需的時間為10天。

其中，步驟7)所述煉苗，所需時間為3天。

其中，所述培養的培養條件為白天溫度28-30℃，夜間溫度24-26℃，光照時間16小時/天，光照強度3000lx。

本發明還提供所述快速獲得日本結縷草組培苗的方法在日本結縷草良種繁育中的應用。