[發(fā)明專利]一種紅澤蘭苷的提純工藝

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510270140.5
• 申請日: 2015-05-26
• 公開（公告）號: CN104926893A
• 公開（公告）日: 2015-09-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉東鋒;楊成東
• 申請（專利權(quán)）人: 南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C07H15/26
• 分類號: C07H15/26;C07H1/08
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種紅澤蘭苷的提純工藝，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

鍵入技術(shù)領(lǐng)域描述段落。

背景技術(shù)

?紅澤蘭苷，分子式C₂₂H₂₂O₉，分子量430.40，CAS號110282-44-5，分子結(jié)構(gòu)式：

紅澤蘭為雙子葉植物藥爵床科植物，以全草入藥，性味苦、微辛，溫，具有疏肝解郁，活血化瘀，溫中利水等功效。紅澤蘭苷是紅澤蘭中主要生理活性成分。

高速逆流色譜技術(shù)是一種不用任何同態(tài)載體的液、液色譜技術(shù)，其原理是基于組分在旋轉(zhuǎn)螺旋管內(nèi)的相對移動(dòng)而互不混溶的兩相溶劑間分布不同而分離，其分離效率和速度可以與HPLC相媲美。HSCCC分離效率高，產(chǎn)品純度高，不存在載體對樣品的吸附和污染，制備量大和溶劑消耗少，操作簡單，能從極復(fù)雜的混合物中分離出特定的組分。被廣泛應(yīng)用天然產(chǎn)物分離制備中。

通過文獻(xiàn)檢索現(xiàn)有制備紅澤蘭苷的方法，多采用常規(guī)試劑提取和大孔樹脂分離，該方法提取效率低，純化步驟繁瑣，污染嚴(yán)重，生產(chǎn)成本高，不適合工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一種操作簡單、所得產(chǎn)品純度較高的紅澤蘭苷提純工藝。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

以紅澤蘭干燥全草為原料，粉碎，過20~60目篩，加入料液比為1：3~5、70~90%乙醇溶液，在pH為4~5的條件下，加入0.1~0.5%的纖維素酶和果膠酶按1：1混合，酶解1~3h，酶解完成后，在溫度為50~60℃下進(jìn)行微波提取1~3次，每次300~900s，提取液上活性炭層析柱，先用2~4倍柱體積、10~15%乙醇洗脫，再用2~5倍柱體積的蒸餾水洗脫，洗脫液減壓濃縮，濃縮液用正丁醇萃取1~2次，收集正丁醇萃取液，減壓濃縮，濃縮液采用高速逆流色譜分離，根據(jù)圖譜收集流分，流分減壓干燥即得。

所述纖維素酶為5~40u/g和果膠酶為5~40u/g。

所述微波提取功率為800~2000W。

所述萃取時(shí)，濃縮液與正丁醇的體積比為1：0.5~1。

所述高速逆流色譜分離條件為：溶劑系統(tǒng)選氯仿、正丙醇、水，混合比例5-10：1-3：5-9，取上相做固定相，下相做流動(dòng)相。

本發(fā)明具有的優(yōu)點(diǎn)為：1、采用了生物酶酶解輔助微波提取的提取方法，提取效率高，溶劑用量少，對環(huán)境污染小；2、采用了高速逆流色譜法純化，方法簡便易操作，溶劑用量小，樣品無損失，制備量大，可連續(xù)制備，而且無污染。

下面將結(jié)合具體實(shí)施方式進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施例。

具體實(shí)施方式：

實(shí)施例1：

以紅澤蘭干燥全草為原料，粉碎，過20目篩，加入料液比為1：3、70%乙醇溶液，在pH為4的條件下，加入0.1%纖維素酶（5u/g）和果膠酶（5u/g）按1：1混合，酶解1h，酶解完成后，在溫度為50℃，功率為800W的條件下進(jìn)行微波提取1次，每次300s，提取液上活性炭層析柱，先用2倍柱體積、10%乙醇洗脫，再用2倍柱體積的蒸餾水洗脫，洗脫液減壓濃縮，濃縮液用正丁醇萃取1次，濃縮液與正丁醇的體積比為1：0.5，收集正丁醇萃取液，減壓濃縮，濃縮液采用高速逆流色譜分離，根據(jù)圖譜收集流分，流分減壓干燥即得。高速逆流色譜分離條件為：溶劑系統(tǒng)選氯仿、正丙醇、水，混合比例5：1：5，取上相做固定相，下相做流動(dòng)相。經(jīng)檢測，所得產(chǎn)品中紅澤蘭苷的含量為90.5%。

實(shí)施例2：

以紅澤蘭干燥全草為原料，粉碎，過40目篩，加入料液比為1：4、80%乙醇溶液，在pH為5的條件下，加入0.3%的纖維素酶（20u/g）和果膠酶（20u/g）按1：1混合，酶解2h，酶解完成后，在溫度為55℃功率為1000W的條件下，進(jìn)行微波提取2次，每次600s，提取液上活性炭層析柱，先用3倍柱體積、10%乙醇洗脫，再用3倍柱體積的蒸餾水洗脫，洗脫液減壓濃縮，濃縮液與正丁醇的體積比為1：1，濃縮液用正丁醇萃取2次，收集正丁醇萃取液，減壓濃縮，濃縮液采用高速逆流色譜分離，根據(jù)圖譜收集流分，流分減壓干燥即得。高速逆流色譜分離條件為：溶劑系統(tǒng)選氯仿、正丙醇、水，混合比例8：2：7，取上相做固定相，下相做流動(dòng)相。經(jīng)檢測，所得產(chǎn)品中紅澤蘭苷的含量為91.5%。

實(shí)施例3：

以紅澤蘭干燥全草為原料，粉碎，過60目篩，加入料液比為1：5、90%乙醇溶液，在pH為5的條件下，加入0.5%纖維素酶（40u/g）和果膠酶（40u/g）按1：1混合，酶解3h，酶解完成后，在溫度為60℃功率為2000W條件下，進(jìn)行微波提取3次，每次900s，提取液上活性炭層析柱，先用4倍柱體積、15%乙醇洗脫，再用5倍柱體積的蒸餾水洗脫，洗脫液減壓濃縮，濃縮液用正丁醇萃取2次，濃縮液與正丁醇的體積比為1：1，收集正丁醇萃取液，減壓濃縮，濃縮液采用高速逆流色譜分離，根據(jù)圖譜收集流分，流分減壓干燥即得。高速逆流色譜分離條件為：溶劑系統(tǒng)選氯仿、正丙醇、水，混合比例10：3：9，取上相做固定相，下相做流動(dòng)相。經(jīng)檢測，所得產(chǎn)品中紅澤蘭苷的含量為92.2%。