[發明專利]一種提取蚯蚓的多種酶及蛋白的方法

有效

• 申請號: 201510267066.1
• 申請日: 2015-05-20
• 公開（公告）號: CN104829687B
• 公開（公告）日: 2018-01-09
• 發明（設計）人: 李大冶
• 申請（專利權）人: 沈陽尊龍生物技術有限公司
• 主分類號: C07K1/34
• 分類號: C07K1/34;C12N9/02;C12N9/68;C12N9/64
• 代理公司: 北京市金棟律師事務所11425
• 代理人: 高會會

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其是涉及一種蚯蚓的提取方法。

背景技術

蚯蚓又名地龍，蚯蚓干蛋白質含量達到70％，是制備藥品、化妝品、保健食品等的原料，具有很大的經濟價值。蚯蚓的化學成分種類繁多，結構復雜，大多為高分子有機化合物，目前被人們研究最多的是蚯蚓多肽，然而其他的有機化合物就被忽略而浪費了，蚯蚓的經濟價值沒有被最大化的挖掘出來。因此，亟需提供一種提取方法，能將蚯蚓的多種有用的有機化合物提取出來，使蚯蚓的經濟價值最大化。

發明內容

針對現有技術的上述缺陷和問題，本發明的目的是提供一種蚯蚓的提取方法，提取方法簡單，易操作，能同時分別將蚓激酶、超氧化物歧化酶、蚯蚓蛋白和蚯蚓多肽提取出來，充分利用了蚯蚓，使蚯蚓的經濟價值最大化。

為了達到上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種提取蚯蚓的多種酶及蛋白的方法，包括以下步驟：

步驟一、將鮮蚯蚓處理干凈后，加入水中，攪碎得漿料，再將漿料離心取上清液；

步驟二、將步驟一得到的上清液進行膜過柱操作，采用截留分子量為1萬至5萬道爾頓的超濾膜進行超濾，得截留液Ⅰ和濾過液Ⅰ，將截留液Ⅰ分為兩份，分別提純后冷凍干燥，得蚓激酶和超氧化物歧化酶；

步驟三、將濾過液Ⅰ再進行膜過柱操作，采用截留分子量大于5萬道爾頓的超濾膜進行超濾，得截留液Ⅱ和濾過液Ⅱ，將截留液Ⅱ冷凍干燥，得蚯蚓蛋白；

步驟四、將濾過液Ⅱ進行膜過柱操作，采用截留分子量小于5萬道爾頓的超濾膜進行超濾，得截留液Ⅲ，將截留液Ⅲ進行噴霧干燥，得蚯蚓多肽；

完成蚯蚓的提取。

進一步地，步驟一中，將鮮蚯蚓處理干凈的具體操作如下：將鮮蚯蚓清洗后，置于水中浸泡24小時，待鮮蚯蚓吐泥完全后，再清洗干凈即可。

進一步地，步驟一中，所述的離心的條件為：采用管式分離機，以12000rpm(轉/分鐘)的轉速，離心。

進一步地，所述管式分離機采用中空纖維分離膜芯。

具體地，所述管式分離機采用分離型管式離心機。具體如型號為GF105的管式分離機。

本發明的一種提取蚯蚓的多種酶及蛋白的方法，一次性順次操作，即可分別得到蚓激酶、超氧化物歧化酶、蚯蚓蛋白和蚯蚓多肽，提取方法簡單，易操作。而且，本發明的提取方法中不采用有機溶劑，節省大量成本投入，而且提取的有機化合物質量好，適用于工業化生產。

本發明提取得到蚓激酶具有溶解血凝塊的功效，且其比活力可達到30000單位，可以用來制作溶栓及廠家制藥。蚯蚓SOD的酶活力可以達到26.0U/mL，因此可以應用于各種生化試劑、美容保健。蚯蚓蛋白提取物中蛋白含量達到6％，可以補充人體蛋白的缺乏，應用于各種食品，化妝品，以及飼料等。蚯蚓多肽提取物中多肽的含量達到38mg/mL，用于應用于人體保健及各種飲料制品。

具體實施方式

下面將結合本發明的實施例，對本發明的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有作出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。

本發明的具體實施方式的一種蚯蚓的提取方法，包括以下步驟：

步驟一、將鮮蚯蚓清洗后，置于水中浸泡24小時，待鮮蚯蚓吐泥完全后，再清洗2-4遍，將鮮蚯蚓處理干凈；然后將處理干凈的鮮蚯蚓加入水中，攪碎得漿料；再將漿料采用分離型中空纖維分離膜芯的管式分離機(例如，型號為GF105的管式分離機)，以12000rpm(轉/分鐘)的轉速，進行離心，取上清液。

步驟二、將步驟一得到的上清液進行膜過柱操作，采用截留分子量為1萬至5萬道爾頓的超濾膜進行超濾，得截留液Ⅰ和濾過液Ⅰ，將截留液Ⅰ分為兩份，分別提純后冷凍干燥，得蚓激酶和超氧化物歧化酶。

步驟三、將濾過液Ⅰ再進行膜過柱操作，采用截留分子量大于5萬道爾頓的超濾膜進行超濾，得截留液Ⅱ和濾過液Ⅱ，將截留液Ⅱ冷凍干燥，得蚯蚓蛋白。

步驟四、將濾過液Ⅱ進行膜過柱操作，采用截留分子量小于5萬道爾頓的超濾膜進行超濾，得截留液Ⅲ，將截留液Ⅲ進行噴霧干燥，得蚯蚓多肽。

完成蚯蚓的提取方法。

本發明的具體實施方式中，對提取得到的蚓激酶、超氧化物歧化酶、蚯蚓蛋白和蚯蚓多肽分別進行鑒定測試，以及相關性能測試。具體如下：

1、蚓激酶