[發(fā)明專利]一種蛹蟲草生產(chǎn)用的專用母種的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510267036.0
• 申請(qǐng)日: 2015-05-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104920064B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-09-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉洋
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖州師范學(xué)院
• 主分類號(hào): A01G1/04
• 分類號(hào): A01G1/04
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及一種蛹蟲草生產(chǎn)用的專用母種的制備方法，屬于食用菌生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

蛹蟲草Cordyceps militaris L.Link，又名北冬蟲夏草，北蟲草。蛹蟲草是為數(shù)不多的幾種可以在人工培養(yǎng)基、家蠶或柞蠶蛹上進(jìn)行人工批量培養(yǎng)的藥用真菌。蛹蟲草的菌絲體及子實(shí)體中含有蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖、SOD、腺苷、鳥苷、尿苷等多種藥用成分，同時(shí)富含多種人體必需氨基酸和微量元素。蛹蟲草工業(yè)化獲得菌絲體及子實(shí)體需要大量制備液體菌種。蛹蟲草的液體菌種制備過(guò)程包括：斜面母種制備→一級(jí)搖瓶→二級(jí)搖瓶(擴(kuò)大培養(yǎng))→液體菌種(發(fā)酵罐)。菌種需逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)，這種生產(chǎn)方法存在生產(chǎn)周期長(zhǎng)、易污染、生產(chǎn)成本高、菌種容易退化等缺點(diǎn)。這些問(wèn)題不利于蛹蟲草菌絲體和子實(shí)體的工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的在于提供一種解決現(xiàn)有技術(shù)問(wèn)題的一種蛹蟲草生產(chǎn)用的專用母種的制備方法。

實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案有以下步驟：

專用母種制備方法：

1、一級(jí)搖瓶菌種

①培養(yǎng)基配方(g/L)：馬鈴薯200g，磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂1g、檸檬酸銨1g、葡萄糖30g、蛋白胨3g、維生素B1 50mg。

②生產(chǎn)工藝：

馬鈴薯浸汁制備：優(yōu)質(zhì)無(wú)菌的馬鈴薯削皮，用水清洗干凈，稱重200g馬鈴薯，切成3-4mm片，放入鍋中，加入清水1L煮到酥而不爛，用紗布過(guò)濾殘?jiān)〕鲞^(guò)濾液倒入容器中冷卻后待用。

配料：稱取磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂1g、檸檬酸銨1g、葡萄糖30g、蛋白胨3g、維生素B1 50mg，加入馬鈴薯煮出液，攪拌均勻，定容至1000mL。

分裝：將配置好的培養(yǎng)基分裝到500mL錐形瓶中，每瓶200mL。三角瓶中放入5mm玻璃株20-30粒，8層紗布和雙層報(bào)紙封口。

滅菌：將培養(yǎng)基放入高壓滅菌鍋，115℃，高壓滅菌20分鐘，冷卻后取出備用。

接種：接入蛹蟲草一級(jí)斜面母種，每瓶接種0.5-1cm²菌種塊，5-6塊。

培養(yǎng)：將接好種的菌瓶，在23-25℃靜置培養(yǎng)2天，再放在回轉(zhuǎn)式搖床中，23-25℃，120-160轉(zhuǎn)/分震蕩培養(yǎng)3-5天。

2、專用母種生產(chǎn)：按重量百分比計(jì)

培養(yǎng)基配方：麩皮78％，小米20％，另外加入營(yíng)養(yǎng)液，料液比1∶1.3，pH 6.5。

營(yíng)養(yǎng)液配方：(蔗糖20g，磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂5g，水1000mL)。

生產(chǎn)工藝：

原料處理：將麩皮和小米分別過(guò)孔徑為1mm和2mm篩，選用兩篩之間的顆粒做為原料。

配料：按營(yíng)養(yǎng)液配方稱取配料，將其溶解在水中，配制營(yíng)養(yǎng)液。然后按培養(yǎng)基配方稱取上述過(guò)篩后的麩皮和小米，按料液比＝1∶1.3加入營(yíng)養(yǎng)液，料液比為重量比，與小米、麩皮等充分混勻。

裝瓶：將上述培養(yǎng)料裝入，500mL茄瓶，攤平，每瓶裝干料50-70g，裝料厚度1-2cm，塞好棉塞，扎好牛皮紙，121-126℃滅菌45分鐘，待溫度降至30℃以下備用。

接種：用滅菌好的移液管把培養(yǎng)好的一級(jí)搖瓶菌種接種到上述茄瓶中的固態(tài)培養(yǎng)基中。

培養(yǎng)：在23-25℃條件下避光培養(yǎng)，菌絲長(zhǎng)滿后即可。

保藏：將培養(yǎng)好的專用母種，加入30-50mL 30％的無(wú)菌甘油，混勻，于4℃冰箱保藏。

本發(fā)明的積極效果有：

(1)省去菌種逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)過(guò)程，節(jié)約生產(chǎn)周期1/3以上。

(2)節(jié)省了種子逐級(jí)擴(kuò)大設(shè)備成本，降低生產(chǎn)成本1/3以上。

(3)接種簡(jiǎn)便，減少污染。

(4)降低了菌株退化風(fēng)險(xiǎn)。

具體實(shí)施方式：

以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步描述：

實(shí)施例1：專用母種制備

專用母種制備方法：

1、一級(jí)搖瓶菌種

①培養(yǎng)基配方(g/L)：馬鈴薯200g，磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂1g、檸檬酸銨1g、葡萄糖30g、蛋白胨3g、維生素B1 50mg。

②生產(chǎn)工藝：

馬鈴薯浸汁制備：優(yōu)質(zhì)無(wú)菌的馬鈴薯削皮，用水清洗干凈，稱重200g馬鈴薯，切成3-4mm片，放入鍋中，加入清水1升煮到酥而不爛，用紗布過(guò)濾殘?jiān)〕鲞^(guò)濾液倒入容器中冷卻后待用。

配料：稱取磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂1g、檸檬酸銨1g、葡萄糖30g、蛋白胨3g、維生素B1 50mg，加入馬鈴薯煮出液，攪拌均勻，定容至1000mL。