[發明專利]一種毒藜堿的制備方法

在審

• 申請號: 201510265114.3
• 申請日: 2015-05-22
• 公開（公告）號: CN104946698A
• 公開（公告）日: 2015-09-30
• 發明（設計）人: 劉東鋒;楊成東
• 申請（專利權）人: 南京澤朗醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12P17/16
• 分類號: C12P17/16
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種毒藜堿的制備方法，屬于生物技術領域。

背景技術

毒藜堿，英文名稱：anabasine，又稱新煙堿；CAS號：13078-04-1；分子式C₁₀H₁₄N₂；分子量：162.23；存在于無葉毒藜(An-abasis?apylla)中。沸點276℃；溶于水、乙醇、乙醚和苯，密度(20℃)1.0445g/cm3，折射率1.5430，旋光度-82.20°，可作殺蟲劑。分子結構式如下：

高速逆流色譜技術是一種不用任何同態載體的液、液色譜技術，其原理是基于組分在旋轉螺旋管內的相對移動而互不混溶的兩相溶劑間分布不同而分離，其分離效率和速度可以與HPLC相媲美。HSCCC分離效率高，產品純度高，不存在載體對樣品的吸附和污染，制備量大和溶劑消耗少，操作簡單，能從極復雜的混合物中分離出特定的組分。被廣泛應用天然產物分離制備中。

目前，國內很少見毒藜堿提取方法的相關專利報道。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的缺陷和不足，提供一種毒藜堿的提取、純化方法，此法操作簡單，所得產品純度高。

為實現上述目的，一種毒藜堿的制備方法通過以下技術方案來實現：

1）原材料的處理：取干燥的毒藜粉碎，過20-80目篩；

2）酶解：稱取一定量的粗粉，加入重量體積比為1：2~5、70~80%的乙醇浸泡，并加入粗粉重量0.1%~0.5%的生物酶在pH值4~5，溫度為45~50℃的條件下浸泡酶解1~3h；

3）超聲提取：酶解結束，將步驟（2）中的酶解物進行超聲提取1~2h，過濾，收集濾液，濾渣重復提取1~2次；

4）純化：收集提取液加入超濾膜超濾，透過液再用納濾膜濃縮，收集濃縮液，依次加入濃縮液體積1/3、1/4、1/6的氯仿攪拌，靜置分層，收集下層，合并萃取液；

5）精制：萃取液采用高速逆流色譜純化，根據圖譜收集目標成分，回收試劑，冷凍干燥即得毒藜堿。

步驟2）中所述的生物酶為果膠酶、纖維素酶、半纖維素酶中的一種或兩種以上的混合物。

步驟3）中所述超聲提取的頻率為20~40KHz，溫度為50~70℃。

步驟4）中所述超濾膜為截留分子量2000-10000的中空纖維素膜，納濾膜為截留分子量100-500的中空纖維素膜。

步驟5）中所述的高速逆流色譜分離的溶劑體系為氯仿-甲醇-水溶劑系統，混合比例2-6：6-10：5-8，取下相做固定相，上相做流動相。

本發明具有的優點為：1、采用了生物酶酶解輔助超聲提取的提取方法，提取效率高，溶劑用量少，對環境污染小；2、采用了高速逆流色譜法純化，方法簡便易操作，溶劑用量小，樣品無損失，制備量大，可連續制備，而且無污染。

具體實施方式

下面將結合具體實施方式進一步說明本發明。

實施例1：

取干燥的毒藜粉碎，過20目篩；稱取一定量的粗粉，加入重量體積比為1：2、70%的乙醇浸泡，并加入粗粉重量0.1%%的果膠酶在pH值4，溫度為45℃的條件下浸泡酶解1h；酶解結束，將所得酶解物在頻率為20KHz，溫度為50℃的條件下進行超聲提取1h，過濾，收集濾液，濾渣重復提取1次；收集提取液加入截留分子量為2000的中空纖維素超濾膜超濾，透過液再用截留分子量為100的中空纖維素納濾膜濃縮，收集濃縮液，依次加入濃縮液體積1/3、1/4、1/6的氯仿攪拌，靜置分層，收集下層，合并萃取液；萃取液采用高速逆流色譜純化，根據圖譜收集目標成分，回收試劑，冷凍干燥即得毒藜堿。高速逆流色譜分離的溶劑體系為氯仿-甲醇-水溶劑系統，混合比例2：6：5，取下相做固定相，上相做流動相。經HPLC檢測，毒藜堿含量為95.2%。

實施例2：