[發明專利]石首魚科HPLC指紋圖譜鑒定方法

有效

• 申請號: 201510248035.1
• 申請日: 2015-05-15
• 公開（公告）號: CN105092755B
• 公開（公告）日: 2016-11-23
• 發明（設計）人: 遲長鳳;王斌;任西杰;徐梅英;吳常文
• 申請（專利權）人: 浙江海洋學院
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 吳秉中

技術領域

本發明涉及一種指紋圖譜種群鑒別分類方法，尤其涉及石首魚科HPLC指紋圖譜鑒定方法。

背景技術

大黃魚（Pseudosciaenacrocea(Richardson)）屬石首魚科（Sciaenidae）黃魚屬，是我國重要的經濟魚類之一。但由于長期以來的濫捕，大黃魚野生資源量日益減少，20世紀70年代后期，大黃魚漁汛已難以形成。為解決大黃魚產量問題，我國水產工作者積極開展大黃魚人工養殖技術研究，至20世紀80年代末，大黃魚人工育苗技術取得突破，網箱養殖技術逐漸成熟完善，較好地滿足了人們對大黃魚產量的需求，但養殖大黃魚的品質與野生大黃魚的品質存在較大差別，且不同環境和養殖方式下的大黃魚品質也參差不齊。為了提高大黃魚養殖質量，闡明影響大黃魚品質差異的因素，不少研究者對大黃魚的肌肉成分進行了比較分析，結果表明不同生長模式、不同家系、不同地域的大黃魚所含的營養成分、理化指標，特別是脂肪含量差異明顯，從而導致養殖大黃魚口感差別明顯。

舟山漁場地處長江、錢塘江、甬江入海口，沿岸流、臺灣暖流和黃海冷水團交匯于此，大黃魚養殖區域潮流較急，較其他海域大黃魚生長慢，養殖周期長，脂肪含量少，肉質比較接近野生魚。基于此，“舟山大黃魚”地理標志證明商標于2009年在國家工商總局商標局正式注冊成功。但是，舟山大黃魚養殖成本大，價格較高，在外在形態上與其他海域養殖大黃魚無明顯差異，普通消費者難以從外在形態進行有效區分，而部分銷售者以假充真欺騙消費者，致使舟山大黃魚優質難以優價，影響了舟山大黃魚產業的發展。因此，建立舟山大黃魚的產地溯源技術和質量評價方法指導大黃魚的生產和銷售具有重要的現實意義。

目前，水產品的產地溯源和鑒別技術主要依靠性狀鑒別和分子生物學方法。性狀鑒別法主要依靠鑒別者的實踐經驗，易受主觀因素影響；分子生物學方法所需試劑昂貴、實驗周期長并要求檢測者有較高的技術水平。本實驗采用的HPLC法，準確度高、操作簡便、實驗成本較低，且已在中藥材和部分海洋藥物（如紫貽貝（Mytilusedulis）、三班海馬（Hippocampustrimaculatus）、馬糞海膽（Hemicentrotuspulcherrimus）等）的質量控制和產地溯源領域得到廣泛應用。但目前基于魚類化學成分建立的HPLC指紋圖譜較少。因此，本文采用HPLC法建立了大黃魚指紋圖譜，結合數理統計的方法，對不同產地大黃魚進行產地溯源和質量鑒定，同時利用該技術進行了石首魚科部分魚類的種類鑒別，取得了較好結果。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術提供一種基于化學組分對大黃魚等主要石首魚科魚類進行產地溯源和種類鑒別、結果穩定可靠、操作方便的石首魚科HPLC指紋圖譜鑒定方法。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案為：石首魚科HPLC指紋圖譜鑒定方法，該方法采用石首魚科魚類肌肉的化學成分HPLC圖譜結合石首魚科鑒定數字方程式組鑒定石首魚科魚的產地或物種。采用HPLC指紋圖譜鑒定石首魚科魚類的種群，具有穩定性好的優點，且避免認為目測、鑒定的識別錯誤，具有極強的重復性。

為優化上述技術方案，采取的措施還包括：石首魚科魚類肌肉按照物料比1g：100ml的比例添加乙酸乙酯進行提??；提取物采用乙酸乙酯補足失重；將提取物濾去殘渣后在40℃以下除去乙酸乙酯，然后加入甲醇溶解殘余物，再用0.45μm濾膜微濾后待用。

制作HPLC圖譜的色譜條件為：

色譜柱采用ThermoC₁₈，250mm×4.6mm，5μm；流速為0.5mL/min；檢測波長為210nm，進樣量為20μL；柱溫為25℃；

流動相采用A相為乙腈、B相為0.1%磷酸水；

A相梯度洗脫條件為：0~5min，1%~3%；5~8min，3%；8~10min，3%~10%；15~20min，30%~45%；20~23min，45%~55%；23~25min，55%~60%；25~30min，60%~70%；30~35min，70%~85%；35~40min，85%~87%；40~43min，87%~90%；43~45min，90%-95%；45~47min，95%~100%；47~60min，100%。

石首魚科鑒定數字方程式組為：