[發(fā)明專利]分析鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510242562.1
• 申請日: 2015-05-12
• 公開（公告）號: CN104807915A
• 公開（公告）日: 2015-07-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳學(xué)松;羅達龍;劉慧妍
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)梧州食品藥品檢驗所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 廣州市越秀區(qū)海心聯(lián)合專利代理事務(wù)所(普通合伙) 44295
• 代理人: 黃為;蔡國

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種分析方法，具體地說，是固相萃取-氣質(zhì)聯(lián)用結(jié)合同位素峰形校正檢索技術(shù)分析鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子，屬于化學(xué)分析領(lǐng)域。

背景技術(shù)

鉤吻(Gelsemium?elegans)又名野葛、胡蔓藤、斷腸草，是馬錢科、鉤吻屬植物胡蔓藤，多年生常綠藤本植物。鉤吻是一種重要的中藥藥材，含有鉤吻堿、鉤吻堿子等多種生物堿。有破積拔毒、祛瘀止痛、殺蟲止癢；鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜；抗炎、散瞳、抗腫瘤的功效，主要用于醫(yī)治疥癩、濕疹、瘰疬、癰腫、疔瘡、跌打損傷、風(fēng)濕痹痛、神經(jīng)痛等病癥^2]。鉤吻主要分布于浙江、福建、湖南、廣東、廣西、貴州、云南等省。同時鉤吻的毒性很大，被認為是世界上最毒的植物之一，近年來，兩廣地區(qū)時會發(fā)生因誤食鉤吻而中毒致死的事件，呈逐年攀升趨勢，因此，研究用于鉤吻植物鑒定和司法鑒定的分析方法是有其必要性。鉤吻的分析方法目前有快速試劑檢測法，液液萃取-薄層鑒別法(TLC)和超聲提取氣質(zhì)聯(lián)用法，但其分析方法耗時費力，純化效果和分析的靈敏度不夠理想，為分析工作帶來一定的難度。

固相萃取(SPE)是對樣品富集的一種有效方法，具有很高的選擇性，被廣泛應(yīng)用于藥物、生物、食品等樣品的分析。

氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，能對汽化后的目標(biāo)物進行分離，并獲得其質(zhì)譜譜圖，起到一定的定性作用。

同位素峰型校正檢索技術(shù)能通過已知的校正物質(zhì)，對未知物的精確分子質(zhì)量和同位素峰形進行校正匹配，在低分辨率質(zhì)譜上實現(xiàn)對分子式的識別。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述問題，本發(fā)明的目的是提供建立固相萃取-氣質(zhì)聯(lián)用并結(jié)合同位素峰形檢索技術(shù)(SPE-GC/MS-CLIPS)分析鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子。

本發(fā)明提供的的技術(shù)方案是這樣的：

一種分析鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子的方法，采用固相萃取-氣質(zhì)聯(lián)用結(jié)合同位素峰形校正檢索技術(shù)分析鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子，依次包括下述步驟：

1)制備供試液

11)稱取粉碎后樣品1.5g，放入100mL錐形瓶中，加入10mL?2％硫酸，超聲提取25min，過濾；

12)凈化依次用2mL異丙醇和2mL環(huán)己烷活化PCX固相萃取柱，準(zhǔn)確移取5mL濾液上柱，再用2mL環(huán)己烷和2mL異丙醇淋洗固相萃取柱，抽干，用10mL3％氨化異丙醇溶液洗脫，收集洗脫液，洗脫液于30℃下氮吹至干，1mL乙酸乙酯定容，作為供試液；

2)測定

將步驟1)制備的供試液上氣質(zhì)聯(lián)用儀測定，鉤吻堿子和鉤吻堿的保留時間分別是16min和17min；

3)與標(biāo)準(zhǔn)譜圖的匹配結(jié)果

鉤吻堿與NIST?08標(biāo)準(zhǔn)譜庫中鉤吻堿匹配度為94.1％，鉤吻堿子的質(zhì)譜譜圖能與文獻中鉤吻堿子的質(zhì)譜譜圖高度相似；

4)同位素峰形校正檢索技術(shù)識別目標(biāo)物的精確分子質(zhì)量

先選取全氟三丁胺的已知離子生成校正函數(shù)，再利用該校正函數(shù)校正目標(biāo)物精確分子質(zhì)量和同位素峰形，從而獲得其分子式，保留時間為16min的目標(biāo)物分子式檢索首位為C₂₀H₂₂N₂O，與鉤吻堿子的分子式一致；保留時間為17min的目標(biāo)物分子式檢索首位為C₂₀H₂₂N₂O₂，與鉤吻堿的分子式一致。

進一步的，上述的分析鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子的方法，所述的色譜條件為：色譜柱：HP-5MS?0.25mm×30m×0.25μm石英毛細管柱；載氣：高純He，流速：1.2mL·min^-1，程序升溫：初始溫度為180℃，保持2min，然后10℃·min^-1升至260℃，保持4min，進樣口溫度：260℃。分流進樣，分流比為50:1，進樣量為1.0μL。

進一步的，上述的分析鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子的方法，所述的質(zhì)譜條件為：離子源為電子轟擊源70ev；離子源溫度230℃，接口溫度260℃，四級桿溫度180℃，質(zhì)量范圍m/z?30～350，采樣模式：原始掃描。以全氟三丁胺標(biāo)準(zhǔn)品為外標(biāo)對質(zhì)譜進行校正。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，Masswork^TM利用CLIPS技術(shù)可同時得到鉤吻堿子和鉤吻堿的精確相對質(zhì)量數(shù)和同位素峰形，在低分辨率的單四極桿質(zhì)譜儀上實現(xiàn)了對精確質(zhì)量數(shù)的測定，其質(zhì)量精度已經(jīng)接近了普通的高分辨質(zhì)譜，與固相萃取-氣質(zhì)聯(lián)用結(jié)合所得到的質(zhì)譜譜圖，可相互印證確證結(jié)果。為鉤吻的植物鑒定和鉤吻中毒司法鑒定工作提供了有力的支持。