[發明專利]一種六次甲基四胺的檢測試劑盒及應用

有效

• 申請號: 201510234034.1
• 申請日: 2015-05-08
• 公開（公告）號: CN104849451B
• 公開（公告）日: 2016-10-19
• 發明（設計）人: 王庭欣;周麗巖;孟墨;龐艷榮;王庭祥;謝飛;任勃儒
• 申請（專利權）人: 河北大學
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/531
• 代理公司: 石家莊國域專利商標事務所有限公司 13112
• 代理人: 白海靜

技術領域

本發明涉及食品安全檢測領域，具體地說是一種六次甲基四胺的檢測試劑盒、檢測方法及應用。

背景技術

六次甲基四胺（俗名烏洛托品），分子式C₆H₁₂N₄，屬化工原料，被衛生部列入第五批《食品中可能違法添加的非食用物質和易濫用的食品添加劑名單》中，六次甲基四胺被禁止添加到食品當中或在加工食品過程中使用。部分違法者將其摻入腐竹、粉絲、水產品等食品中，會起到增白、保鮮、增加口感、防腐的效果。六次甲基四胺本身屬低毒類，可作為藥物服用。但其在酸性條件下，能分解出甲醛，甲醛易與體內多種化學結構的受體發生反應，如與氨基化合物可以發生縮合，與巰基化合物加成，使蛋白質變性。甲醛在體內還可還原為醇，故可表現出甲醇的毒理作用，對人體的腎、肝、中樞神經、免疫功能、消化系統等均有損害。

目前，國家標準中還沒有關于六次甲基四胺的指定檢測方法，六次甲基四胺屬于小分子物質，如想要對其進行檢測，主要采用儀器檢測的方法，比如高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜-質譜聯用法（GC-MS）、液相色譜串聯質譜法（LC-MSMS）等。這些方法雖然可以精確地進行定性及定量檢測分析，但是存在檢測儀器昂貴、成本高、需要專門的技術人員來檢測、檢測時間長、方法操作復雜等缺陷，尤其不適用于食品安全監管現場的快速檢測。免疫學檢測方法是應用免疫學理論設計的一系列測定抗原、抗體、免疫細胞及其分泌的細胞因子的實驗方法。它可以克服儀器檢測法的上述缺陷，能夠以其簡單、快速、靈敏度高、特異性強、結果直觀、無需儀器等高效地應用于食品安全檢測領域。免疫學檢測方法中應用較廣泛的是酶聯免疫法，簡稱ELISA法。但是ELISA法相對更適用于定量檢測方法，檢測時間相對較長，不適于快速定性檢測。因此，為適應市場需求，行業內迫切需要開發一種簡單、快速、靈敏度高、特異性強、結果直觀、無需精密儀器的六次甲基四胺的定性檢測裝置及檢測方法。

發明內容

本發明的目的是提供一種六次甲基四胺的檢測試劑盒、檢測方法及應用，以解決在食品安全檢驗時，現有方法無法快速、準確地、大批量定性或半定量檢測六次甲基四胺的問題。

本發明是通過以下技術方案實現的：一種六次甲基四胺的檢測試劑盒，其特征在于，包括：

檢測卡；所述檢測卡包括硝酸纖維素膜，在所述硝酸纖維素膜上設有一條含六次甲基四胺包被抗原的檢測帶和一條含有羊抗兔二抗的質控帶；

膠體金標記六次甲基四胺多克隆抗體復合物；以及

磷酸鹽緩沖稀釋液。

所述六次甲基四胺包被抗原是通過以下方法制備的：配制濃度為15-25mg/ml的六次甲基四胺溶液；配置濃度為0.1mol/L、pH值為7.4、含有卵清蛋白4.5-5.0mg/ml的磷酸鹽緩沖液；將六次甲基四胺溶液緩慢滴加到含卵清蛋白磷酸緩沖溶液中，之后，再加入體積比濃度為25%戊二醛水溶液，混勻，室溫靜置1小時，4℃靜置過夜，裝入透析袋，4℃下在0.01mol/L、pH值為7.4的磷酸鹽緩沖液中連續透析5天，每天換液1次，得到的六次甲基四胺包被抗原；所述六次甲基四胺:?含卵清蛋白的磷酸緩沖溶液:戊二醛水溶液的添加比例為5-6?mg?:?2-5ml?:?1-2?ml。

所述膠體金標記六次甲基四胺多克隆抗體復合物是通過以下步驟制備的：

（A）合成六次甲基四胺完全抗原：配制濃度為200-300mg/ml的六次甲基四胺溶液；配制pH值為7-10、離子濃度為10-1000?mmol、含載體蛋白30-50?mg/ml的復合磷酸鹽緩沖液；所述載體蛋白為牛血清白蛋白；將所述六次甲基四胺溶液滴加到所述復合磷酸鹽緩沖液中，再加入體積比濃度為25%的戊二醛水溶液，混勻，室溫靜置1-2小時，4℃冰箱過夜，再裝入透析袋中，透析3-5天，每天換液1-2次，得六次甲基四胺完全抗原；所述六次甲基四胺:復合磷酸鹽緩沖液:戊二醛水溶液質量體積比為：80-120?mg?:?1-5ml?:?2-3ml；

（B）制備六次甲基四胺多克隆抗體：采用所述六次甲基四胺完全抗原進行動物免疫，獲得六次甲基四胺多克隆抗體；

（C）制備膠體金溶液：將100?ml質量比濃度為0.01%的HAuCl4水溶液用恒溫磁力攪拌器加熱至沸騰，保持煮沸2-3?min，攪拌，加入1.2?ml質量比濃度為1%的檸檬酸三鈉水溶液，待溶液顏色變為透明的紅色并不再變化時，保持煮沸15?min，停止加熱，攪拌，冷卻至室溫，用蒸餾水恢復至100?ml；