[發(fā)明專利]一株具有廣譜抑菌特性的植物乳桿菌AB-2及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510230679.8
• 申請日: 2015-05-08
• 公開（公告）號: CN104789511A
• 公開（公告）日: 2015-07-22
• 發(fā)明（設計）人: 陳永福;張和平;李常坤
• 申請（專利權）人: 內蒙古農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A61K35/747;A61P31/04;A61P31/10;A23L3/3571;A23L1/30;A23K1/16;C12R1/25
• 代理公司: 北京君智知識產(chǎn)權代理事務所 11305
• 代理人: 劉秀娟

技術領域

本發(fā)明涉及一株分離自四川泡菜中的植物乳桿菌菌株(Lactobacillus?plantarum?AB-2)和以該菌株為發(fā)酵劑或添加劑的發(fā)酵乳制品及其它健康保健食品中的應用。

技術背景

隨著公眾衛(wèi)生和安全意識的提升，食品安全問題被越來越多的公眾所重視，因食品安全問題可能會導致重大的經(jīng)濟損失，嚴重危害人體健康和社會治安。這其中食品微生物污染問題是食品安全的主要問題之一。食品微生物的污染主要是細菌污染，特別是常見致病性的單細胞李斯特氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和傷寒沙門氏菌等細菌均能引起食源性疾病，現(xiàn)在這一問題已經(jīng)引起了公眾的注意，普通的化學藥物治療方法又易使致病菌產(chǎn)生抗藥性、藥物殘留和治療效果不佳等缺陷。乳酸菌被用于多種發(fā)酵食品加工，已被人類食用上千年，最近的研究表明乳酸菌能有效的抑制致病菌的生長，又因其具有穩(wěn)定性、免疫性和安全性等優(yōu)勢，被認為是新型食品防腐劑和保健食品研究的重要方向。

乳酸菌對一些腸道致病菌有較好的抑制作用。這些抑制作用可能是由于產(chǎn)生酸性物質使不耐酸致病菌生長繁殖受到抑制；產(chǎn)生類似細菌素的小分子肽類使致病菌受到抑制作用；產(chǎn)生溶菌酶、過氧化氫等物質殺死潛在的病原菌。乳酸菌可維持人體中基本的營養(yǎng)物質，清除食物中的毒性物質，根除發(fā)酵食物中的病原體，清除腸道微生物產(chǎn)生的毒素和廢物，形成生物學屏障。然而，乳酸菌想要應用于具有抑菌功能的保健品生產(chǎn)，還需要對其抑菌物質的穩(wěn)定性和益生特性進行評價，其中穩(wěn)定性包括在不同的pH、排除不穩(wěn)定的抑菌物質過氧化氫和對蛋白酶的穩(wěn)定性，而益生特性則是要檢測其在人體內應用的可行性。

發(fā)明內容

本發(fā)明的另一目的在于提供一種新型乳桿菌菌株，其具有優(yōu)異的作為益生菌基本性質的耐酸性、耐膽汁酸性、過氧化氫酶的穩(wěn)定性、蛋白酶穩(wěn)定性和溫度穩(wěn)定性。

本發(fā)明的另一目的是提供新型乳桿菌用于預防和治療腸道疾病的組合物。

本發(fā)明的另一目的是提供新型乳桿菌廣譜抑菌活性的應用。

本發(fā)明的另一目的是提供新型乳桿菌在食品防腐劑和保健食品中的應用。

本發(fā)明的另一目的是提供新型乳桿菌在農(nóng)業(yè)生物農(nóng)藥和果蔬保鮮劑方面的應用。

本發(fā)明的另一目的是提供新型乳桿菌在整腸中的應用，具有良好的益生特性。

本發(fā)明的另一目的是提供新型乳桿菌以作為發(fā)酵劑或添加劑在發(fā)酵乳制品及其他健康保健食品中的應用。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一株植物乳桿菌的新菌株(L.plantarum?AB-2)及其制備方法。該菌株(L.plantarum?AB-2)已于2014年9月15日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物菌種保藏中心保藏，保藏號為CGMCC?No.9654。

本發(fā)明的植物乳桿菌(L.plantarum?AB-2)是經(jīng)過篩選的、從四川泡菜中分離得到的具有廣譜抑菌活性的植物乳桿菌。

本發(fā)明的植物乳桿菌(L.plantarum?AB-2)是通過如下方法分離得到。

a.菌株分離方法:

先將從四川采集的泡菜進行前處理，再做梯度稀釋后(10^-4，10^-5，10^-6)涂布于含有放線菌酮(0.1wt％，OXID公司)和硫酸粘菌素(0.1wt％，OXID公司)的MRS瓊脂培養(yǎng)基或者M17瓊脂培養(yǎng)基(OXID公司)上，30℃厭氧培養(yǎng)48h～72h，挑取單菌落，轉接于TPY增菌培養(yǎng)液中，30℃培養(yǎng)24h～48h，劃線接種于MRS瓊脂培養(yǎng)基(OXID)，30℃培養(yǎng)24h～48h，觀察記錄菌落形態(tài)和革蘭氏染色細胞形態(tài)特征，并同時進行過氧化氫酶試驗。將革蘭氏染色陽性、過氧化氫酶試驗陰性的菌，暫定為乳酸菌。將菌株接種于MRS液體培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24h～48h后，做進一步鑒定和保存。

b.分子生物學鑒定:

本發(fā)明的植物乳桿菌(L.plantarum?AB-2)是通過如下方法進行分子生物學鑒定的。將冷凍保存的供試菌株接種于TPY液體培養(yǎng)基中，30℃恒溫培養(yǎng)24h，經(jīng)TPY傳代培養(yǎng)2～3代后，取2mL對數(shù)生長末期的菌體培養(yǎng)物置于無菌EP管內離心，經(jīng)8000×g離心3min(4℃)后收集菌體，棄上清，采用乳酸菌專用CTAB凍融法提取菌株的基因組DNA。