[發明專利]一株具有廣譜抑菌特性的植物乳桿菌AB-2及其應用

有效

• 申請號: 201510230679.8
• 申請日: 2015-05-08
• 公開（公告）號: CN104789511A
• 公開（公告）日: 2015-07-22
• 發明（設計）人: 陳永福;張和平;李常坤
• 申請（專利權）人: 內蒙古農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A61K35/747;A61P31/04;A61P31/10;A23L3/3571;A23L1/30;A23K1/16;C12R1/25
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所 11305
• 代理人: 劉秀娟

技術領域

本發明涉及一株分離自四川泡菜中的植物乳桿菌菌株(Lactobacillus?plantarum?AB-2)和以該菌株為發酵劑或添加劑的發酵乳制品及其它健康保健食品中的應用。

技術背景

隨著公眾衛生和安全意識的提升，食品安全問題被越來越多的公眾所重視，因食品安全問題可能會導致重大的經濟損失，嚴重危害人體健康和社會治安。這其中食品微生物污染問題是食品安全的主要問題之一。食品微生物的污染主要是細菌污染，特別是常見致病性的單細胞李斯特氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和傷寒沙門氏菌等細菌均能引起食源性疾病，現在這一問題已經引起了公眾的注意，普通的化學藥物治療方法又易使致病菌產生抗藥性、藥物殘留和治療效果不佳等缺陷。乳酸菌被用于多種發酵食品加工，已被人類食用上千年，最近的研究表明乳酸菌能有效的抑制致病菌的生長，又因其具有穩定性、免疫性和安全性等優勢，被認為是新型食品防腐劑和保健食品研究的重要方向。

乳酸菌對一些腸道致病菌有較好的抑制作用。這些抑制作用可能是由于產生酸性物質使不耐酸致病菌生長繁殖受到抑制；產生類似細菌素的小分子肽類使致病菌受到抑制作用；產生溶菌酶、過氧化氫等物質殺死潛在的病原菌。乳酸菌可維持人體中基本的營養物質，清除食物中的毒性物質，根除發酵食物中的病原體，清除腸道微生物產生的毒素和廢物，形成生物學屏障。然而，乳酸菌想要應用于具有抑菌功能的保健品生產，還需要對其抑菌物質的穩定性和益生特性進行評價，其中穩定性包括在不同的pH、排除不穩定的抑菌物質過氧化氫和對蛋白酶的穩定性，而益生特性則是要檢測其在人體內應用的可行性。

發明內容

本發明的另一目的在于提供一種新型乳桿菌菌株，其具有優異的作為益生菌基本性質的耐酸性、耐膽汁酸性、過氧化氫酶的穩定性、蛋白酶穩定性和溫度穩定性。

本發明的另一目的是提供新型乳桿菌用于預防和治療腸道疾病的組合物。

本發明的另一目的是提供新型乳桿菌廣譜抑菌活性的應用。

本發明的另一目的是提供新型乳桿菌在食品防腐劑和保健食品中的應用。

本發明的另一目的是提供新型乳桿菌在農業生物農藥和果蔬保鮮劑方面的應用。

本發明的另一目的是提供新型乳桿菌在整腸中的應用，具有良好的益生特性。

本發明的另一目的是提供新型乳桿菌以作為發酵劑或添加劑在發酵乳制品及其他健康保健食品中的應用。

為了實現上述目的，本發明提供一株植物乳桿菌的新菌株(L.plantarum?AB-2)及其制備方法。該菌株(L.plantarum?AB-2)已于2014年9月15日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物菌種保藏中心保藏，保藏號為CGMCC?No.9654。

本發明的植物乳桿菌(L.plantarum?AB-2)是經過篩選的、從四川泡菜中分離得到的具有廣譜抑菌活性的植物乳桿菌。

本發明的植物乳桿菌(L.plantarum?AB-2)是通過如下方法分離得到。

a.菌株分離方法:

先將從四川采集的泡菜進行前處理，再做梯度稀釋后(10^-4，10^-5，10^-6)涂布于含有放線菌酮(0.1wt％，OXID公司)和硫酸粘菌素(0.1wt％，OXID公司)的MRS瓊脂培養基或者M17瓊脂培養基(OXID公司)上，30℃厭氧培養48h～72h，挑取單菌落，轉接于TPY增菌培養液中，30℃培養24h～48h，劃線接種于MRS瓊脂培養基(OXID)，30℃培養24h～48h，觀察記錄菌落形態和革蘭氏染色細胞形態特征，并同時進行過氧化氫酶試驗。將革蘭氏染色陽性、過氧化氫酶試驗陰性的菌，暫定為乳酸菌。將菌株接種于MRS液體培養基中，37℃培養24h～48h后，做進一步鑒定和保存。

b.分子生物學鑒定:

本發明的植物乳桿菌(L.plantarum?AB-2)是通過如下方法進行分子生物學鑒定的。將冷凍保存的供試菌株接種于TPY液體培養基中，30℃恒溫培養24h，經TPY傳代培養2～3代后，取2mL對數生長末期的菌體培養物置于無菌EP管內離心，經8000×g離心3min(4℃)后收集菌體，棄上清，采用乳酸菌專用CTAB凍融法提取菌株的基因組DNA。