[發(fā)明專利]血管瘤集落形成細(xì)胞和非移植血管瘤細(xì)胞

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510225315.0
• 申請日: 2009-05-06
• 公開（公告）號: CN104774809A
• 公開（公告）日: 2015-07-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: R·蘭加;盧世江
• 申請（專利權(quán)）人: 先進(jìn)細(xì)胞技術(shù)公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12N5/0735
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會專利商標(biāo)事務(wù)所 11038
• 代理人: 李程達(dá)

1.一種體外產(chǎn)生和擴(kuò)增人類血管瘤集落形成細(xì)胞的方法，所述方法包括步驟：

(a)在存在至少一種足夠?qū)⑷祟惗嗄芨杉?xì)胞誘導(dǎo)分化成胚狀體的量的生長因子的情況下，在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)包含人類多能干細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)物；和

(b)向所述含胚狀體的培養(yǎng)物中加入至少兩種生長因子，并繼續(xù)在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述培養(yǎng)物，

其中所述生長因子的量足夠使人類血管瘤集落形成細(xì)胞在所述胚狀體培養(yǎng)物中擴(kuò)增，

其中在所述方法的步驟(a)和(b)的整個過程中，所述多能干細(xì)胞、胚狀體和血管瘤集落形成細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中生長，

其中步驟(b)中所述至少兩種生長因子包括BMP4和VEGF，

其中所述方法不涉及人胚胎的工業(yè)或商業(yè)目的的應(yīng)用，并且

其中所述多能干細(xì)胞來自多能干細(xì)胞系。

2.一種體外產(chǎn)生和擴(kuò)增人類血管瘤集落形成細(xì)胞的方法，所述方法包括步驟：

(a)在存在至少一種足夠?qū)⑷祟惗嗄芨杉?xì)胞誘導(dǎo)分化成胚狀體的量的生長因子的情況下，在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)包含人類多能干細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)物；和

(b)向所述含胚狀體的培養(yǎng)物中加入至少兩種生長因子，并繼續(xù)在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述培養(yǎng)物，其中所述生長因子的量足夠使人類血管瘤集落形成細(xì)胞在所述胚狀體培養(yǎng)物中擴(kuò)增，

(c)將所述胚狀體解聚為單細(xì)胞；

(d)向所述含所述單細(xì)胞的培養(yǎng)物中加入至少一種生長因子，并在無血清培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)所述培養(yǎng)物，其中所述生長因子的量足夠使人類血管瘤集落形成細(xì)胞在所述含所述單細(xì)胞的培養(yǎng)物中擴(kuò)增；

其中在所述方法的步驟(a)-(d)的整個過程中，所述多能干細(xì)胞、胚狀體和血管瘤集落形成細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中生長，

其中步驟(b)中所述至少兩種生長因子包括BMP4和VEGF，

其中所述方法不涉及人胚胎的工業(yè)或商業(yè)目的的應(yīng)用，并且

其中所述多能干細(xì)胞來自多能干細(xì)胞系。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述多能干細(xì)胞是來自胚胎干細(xì)胞系的胚胎干細(xì)胞。

4.通過權(quán)利要求1的方法產(chǎn)生的分離的血管瘤集落形成細(xì)胞。

5.通過權(quán)利要求2的方法產(chǎn)生的分離的血管瘤集落形成細(xì)胞。

6.權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述生長因子選自血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、骨形態(tài)生成蛋白(BMP)、干細(xì)胞因子(SCF)、Flt-3L(FL)、促血小板生成素(TPO)和促紅細(xì)胞生成素(EPO)。

7.權(quán)利要求1或2所述的方法，其中在培養(yǎng)細(xì)胞的0－48小時內(nèi)將所述血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)或骨形態(tài)生成蛋白(BMP)，或兩者加入到步驟(a)中。

8.權(quán)利要求1或2所述的方法，其中從開始步驟(a)的48－72小時內(nèi)將所述干細(xì)胞因子(SCF)、Flt-3L(FL)或促血小板生成素(TPO)，或它們的任何組合加入到所述培養(yǎng)物中。

9.權(quán)利要求1或2所述的方法，其中從開始步驟(a)的48－72小時內(nèi)將所述生長因子加入到步驟(b)中。