[發(fā)明專利]用于生產(chǎn)葡糖胺和N-乙酰氨基葡糖的方法和物質(zhì)

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510220996.1
• 申請(qǐng)日: 2003-07-01
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105039464A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-11-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄧明德;J.戴維.安杰勒;唐.西倫;艾倫.D.格倫德;小托馬斯.A.杰里爾;坎迪斯.利納;歐文.馬思里;萊因哈特.羅森;杰夫.朗寧;戴夫.西弗森;宋林生;薩拉.沃辛克
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 阿基昂生命科學(xué)公司;以生物技術(shù)資源部的名義經(jīng)營(yíng)
• 主分類號(hào): C12P19/26
• 分類號(hào): C12P19/26;C12N1/21;C12N9/10;C12N15/54;C12R1/19
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務(wù)所 11105
• 代理人: 張文輝

1.通過(guò)發(fā)酵生產(chǎn)N-乙酰氨基葡糖-6-磷酸或N-乙酰氨基葡糖的方法，包括：

a)在發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)大腸桿菌(E.coli)微生物，所述大腸桿菌微生物包含至少一種增加葡糖胺-6-磷酸乙酰轉(zhuǎn)移酶活性的遺傳修飾，其中所述遺傳修飾包括用至少一種包含編碼葡糖胺-6-磷酸乙酰轉(zhuǎn)移酶的核酸序列的重組核酸分子轉(zhuǎn)化所述的微生物，所述葡糖胺-6-磷酸乙酰轉(zhuǎn)移酶具有氨基酸序列SEQIDNO:30，其中所述培養(yǎng)在開(kāi)始培養(yǎng)步驟的48小時(shí)內(nèi)在發(fā)酵培養(yǎng)基中產(chǎn)生24g/L以上的量的N-乙酰氨基葡糖；和

(b)收集從培養(yǎng)步驟中產(chǎn)生的產(chǎn)物，所述產(chǎn)物選自下組：來(lái)自發(fā)酵培養(yǎng)基的N-乙酰氨基葡糖-6-磷酸和N-乙酰氨基葡糖。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述回收步驟包括將所述發(fā)酵培養(yǎng)基與離子交換樹(shù)脂相接觸。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述回收步驟包括從所述發(fā)酵培養(yǎng)基中沉淀含N-乙酰氨基葡糖的固體。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述回收步驟包括從所述發(fā)酵培養(yǎng)基中結(jié)晶含N-乙酰氨基葡糖的固體。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述回收步驟包括濃縮含可溶性N-乙酰氨基葡糖的發(fā)酵培養(yǎng)基。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述回收步驟包括在酸和熱條件下水解所述N-乙酰氨基葡糖。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述回收步驟包括通過(guò)酶促去乙酰化水解N-乙酰氨基葡糖。

8.一種遺傳修飾的大腸桿菌微生物，包括提高葡糖胺-6-磷酸乙酰轉(zhuǎn)移酶的活性的至少一種遺傳修飾，其中所述遺傳修飾包括利用至少一種重組核酸分子轉(zhuǎn)化所述微生物，所述核酸分子包括編碼葡糖胺-6-磷酸乙酰轉(zhuǎn)移酶的核酸序列，所述葡糖胺-6-磷酸乙酰轉(zhuǎn)移酶具有與SEQIDNO:30的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。

9.如權(quán)利要求8所述的遺傳修飾的大腸桿菌微生物，其中所述微生物還包括降低葡糖胺-6-磷酸脫氨酶的活性的至少一種遺傳修飾，其中降低葡糖胺-6-磷酸脫氨酶的活性的所述遺傳修飾包括使所述微生物中的編碼葡糖胺-6-磷酸脫氨酶的內(nèi)源性基因部分或全部缺失或失活。

10.如權(quán)利要求8所述的遺傳修飾的大腸桿菌微生物，其中所述葡糖胺6-磷酸合酶具有與野生型葡糖胺-6-磷酸合酶相比較減少葡糖胺-6-磷酸合酶的產(chǎn)物抑制的修飾，其中所述葡糖胺-6-磷酸合酶包括選自下組的氨基酸序列：SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:8、SEQIDNO:10、SEQIDNO:12和SEQIDNO:14。