[發(fā)明專利]一種幽門螺桿菌IgG抗體ELISA半定量檢測試劑盒及其應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201510219965.4
• 申請日: 2015-04-30
• 公開（公告）號: CN104833804A
• 公開（公告）日: 2015-08-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉峰
• 申請（專利權(quán)）人: 必歐瀚生物技術(shù)（合肥）有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 安徽合肥華信知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 34112
• 代理人: 余成俊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種生物檢測試劑盒，具體是一種幽門螺桿菌IgG抗體ELISA半定量檢測試劑盒，可用于快速檢測血清中幽門螺桿菌IgG抗體并對IgG抗體含量進(jìn)行半定量計算的ELISA檢測試劑盒。

背景技術(shù)

幽門螺桿菌(Helicobacter?pylori,H.p)，由巴里·馬歇爾(Barry?J.Marshall)和羅賓·沃倫(J.Robin?Warren)二人首次發(fā)現(xiàn)，此二人因此獲得2005年的諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎。幽門螺桿菌是一種單極、多鞭毛、末端鈍圓、螺旋形彎曲的細(xì)菌，長2.5～4.0μm，寬0.5～1.0μm。在胃粘膜上皮細(xì)胞表面常呈典型的螺旋狀或弧形。

幽門螺桿菌感染是慢性活動性胃炎、消化性胃潰瘍以及胃黏膜相關(guān)淋巴組織(MALT)淋巴瘤的主要致病因素，并且與胃癌的發(fā)生具有密切相關(guān)性。1994年世界衛(wèi)生組織/國際癌癥研究機(jī)構(gòu)(WHO/IARC)將幽門螺桿菌定為I類致癌原。在亞洲地區(qū)，中國大陸、越南、印度等少年幽門螺桿菌的感染率分別60％、40％、70％，慢性胃炎患者的胃粘膜活檢標(biāo)本中幽門螺桿菌檢出率可達(dá)80％～90％，而消化性胃潰瘍患者更高，可達(dá)95％以上，甚至接近100％。胃癌由于局部上皮細(xì)胞已發(fā)生異化，因此其檢出率高低報道不一。幽門螺桿菌的胃部感染已是個世界性醫(yī)學(xué)問題，對其進(jìn)行準(zhǔn)確診斷有利于控制H.p傳播與流行及根除HP感染治療的監(jiān)測。

1983年通過胃鏡取活檢標(biāo)本分離培養(yǎng)成功以來，對幽門螺桿菌感染的診斷已發(fā)展出了許多方法，包括有細(xì)菌學(xué)、病理學(xué)、血清學(xué)、同位素示蹤、分子生物學(xué)等。但總的講來，從標(biāo)本采集角度看，可以分為侵入性和非侵入性兩大類。

侵入性方法主要指必需通過胃鏡取活檢標(biāo)本檢查的方法，是目前消化病學(xué)科的常規(guī)方法。它包括細(xì)菌的分離培養(yǎng)和直接涂片、快速尿素酶試驗(yàn)，藥敏試驗(yàn)。

非侵入性方法主要指不通過胃鏡取活檢標(biāo)本診斷幽門螺桿菌標(biāo)本感染的方法。這類方法包括抗體檢測、抗原檢測、尿素13C/14C呼氣試驗(yàn)等。抗體檢測目前已有的方法包括酶聯(lián)免疫法、免疫印跡法、膠體金法和膠乳增強(qiáng)免疫比濁法等。

血清學(xué)檢測是一項(xiàng)常用的非侵入性檢測方法，尤其適用于Hp感染率較高的地區(qū)。Hp引起慢性炎癥，系統(tǒng)的免疫反應(yīng)會持續(xù)存在，產(chǎn)生IgG抗體。常用的血清學(xué)試驗(yàn)包括ELISA法、快速全血/血清試驗(yàn)、蛋白印跡等方法，其中ELISA法最常用。ELlSA法準(zhǔn)確率高達(dá)90％～95％，且ELISA試劑盒可以給出抗體定量檢測結(jié)果，且該法不受藥物的影響。但遺憾的是目前國內(nèi)外市場上各種幽門螺桿菌IgG抗體ELISA檢測試劑盒均為定性檢測，而IgG抗體含量對于幽門螺桿菌的定殖密度以及幽門螺桿菌根除療效判斷均有重要的提示作用。本發(fā)明制備出幽門螺桿菌IgG抗體標(biāo)準(zhǔn)液，在此基礎(chǔ)上采用間接ELISA法，可方便快速地對血清中特異性幽門螺桿菌IgG抗體進(jìn)行半定量檢測。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種幽門螺桿菌IgG型抗體ELISA半定量檢測試劑盒。本發(fā)明的試劑盒主要用于指導(dǎo)幽門螺旋桿菌感染引起的慢性胃炎，消化性潰瘍等疾病的輔助臨床診斷和臨床監(jiān)測指標(biāo)。

本發(fā)明技術(shù)方案如下：

一種幽門螺桿菌IgG抗體ELISA半定量檢測試劑盒，其特征在于：由幽門螺桿菌抗原包被酶標(biāo)反應(yīng)板、標(biāo)本稀釋液、洗滌液、酶標(biāo)二抗、底物液、終止液、陽性對照液、陰性對照液及標(biāo)準(zhǔn)液構(gòu)成，

所述的幽門螺桿抗原包被酶標(biāo)反應(yīng)板通過下列步驟制備而成：

(1)取96孔酶標(biāo)板一塊；

(2)將幽門螺桿菌抗原用包被液按1：1000的倍數(shù)進(jìn)行稀釋，將稀釋好的抗原液于每個酶標(biāo)板孔中加入110μl，把酶標(biāo)板置入濕盒內(nèi)，在2-8℃包被過夜；

(3)用洗滌液清洗：用洗滌液清洗包被過夜的酶標(biāo)板，每孔加入350ul洗滌液，清洗2-4次；

(4)添加穩(wěn)定緩沖液：每孔加入150ul穩(wěn)定緩沖液，在18-25℃條件下孵育2-4小時，然后抽干；

(5)取抽干的抗原包被板加200μl?PBS稀釋的10％牛血清蛋白在37℃封閉1-2小時，得到抗原包被酶標(biāo)反應(yīng)板；

(6)包裝：用鋁箔袋包裝，并在袋中放入干燥劑，包裝后儲存在2-8℃的冷庫中；

所述的包被液：0.05mol/L碳酸鹽緩沖液(pH9.6)0.75g碳酸鈉,1.46g碳酸氫鈉,加去離子水定容至500ml；

所述的標(biāo)本稀釋液：10％牛血清蛋白+0.1％ProClin300+0.01M?pH7.4的磷酸鹽緩沖液(PBS)；