[發(fā)明專(zhuān)利]用于檢測(cè)除草劑耐受性玉米植物DBN9868的核酸序列及其檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510219912.2
• 申請(qǐng)日: 2015-04-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104878096B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-01-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 康越景;郭明欣;劉海利;張成偉;丁德榮;焦國(guó)偉;魏雪松;湯波;夏祖靈;熊冠軍;徐亮;鮑曉明
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 北京大北農(nóng)科技集團(tuán)股份有限公司;北京大北農(nóng)生物技術(shù)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6895
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11;C12N5/10;A01N47/44;A01P7/04;A01G7/06;C12N15/82;C12N15/32;C12N15/54;A01H1/02;A01H6/46
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明涉及一種用于檢測(cè)除草劑耐受性玉米植物DBN9868的核酸序列及其檢測(cè)方法，所述玉米植物的核酸序列包括SEQ ID NO:1或其互補(bǔ)序列、或者SEQ ID NO:2或其互補(bǔ)序列。本發(fā)明轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9868對(duì)草甘膦除草劑和草銨膦除草劑具有較好的耐受性，對(duì)產(chǎn)量無(wú)影響，且檢測(cè)方法可以準(zhǔn)確快速的鑒定生物樣品中是否包含轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9868的DNA分子。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種用于檢測(cè)除草劑耐受性玉米植物DBN9868的核酸序列及其檢測(cè)方法，特別是涉及一種耐受草甘膦和草銨膦的玉米植物DBN9868和檢測(cè)生物樣品中是否包含特定轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9868的DNA分子的方法。

背景技術(shù)

N-膦酰甲基甘氨酸，也稱(chēng)為草甘膦，是一種內(nèi)吸傳導(dǎo)型慢性廣譜滅生性除草劑。草甘膦是5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶(EPSPS)的合成底物磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，可抑制PEP和3-磷酸莽草酸這兩種底物在EPSPS催化下向5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸莽草酸的轉(zhuǎn)化，從而阻斷芳香族氨基酸合成前體-莽草酸的合成途徑，使蛋白質(zhì)的合成受到干擾導(dǎo)致植物和細(xì)菌死亡。

草甘膦耐受性可以通過(guò)表達(dá)修飾的EPSPS來(lái)實(shí)現(xiàn)。修飾的EPSPS對(duì)草甘膦具有更低的親和性，因而在草甘膦存在的情況下，EPSPS保持了它們的催化活性，即獲得了草甘膦耐受性。

玉米(Zea mays L.)在世界上很多地區(qū)都是主要的糧食作物。在玉米生產(chǎn)中除草劑耐受性是一項(xiàng)重要的農(nóng)藝性狀，特別是對(duì)草甘膦除草劑的耐受性。玉米對(duì)草甘膦除草劑的耐受性可以通過(guò)轉(zhuǎn)基因的方法使草甘膦除草劑耐受型基因(EPSPS，CP4)在玉米植物中表達(dá)而獲得，例如玉米事件NK603、玉米事件MON88017等。

草甘膦耐受性耕種系統(tǒng)的普遍采用和草甘膦使用的日益增加已經(jīng)導(dǎo)致近年來(lái)草甘膦抗性雜草的流行。在種植者面對(duì)草甘膦抗性雜草或向更難以控制的雜草物種轉(zhuǎn)變的地區(qū)，種植者可以通過(guò)與能夠控制遺漏雜草的其它除草劑混合或交替使用來(lái)補(bǔ)償草甘膦的弱點(diǎn)。

草銨膦是膦絲菌素類(lèi)除草劑中的一種非系統(tǒng)性、非選擇性除草劑。主要用于一年生或多年生闊葉雜草的出土后控制，是通過(guò)L-膦絲菌素(草銨膦中的活性成分)對(duì)谷氨酰胺合酶(一種對(duì)于植物中的氨解毒必需的酶)的不可逆抑制來(lái)控制雜草的。與草甘膦殺根不同，草銨膦先殺葉，通過(guò)植物蒸騰作用可以在植物木質(zhì)部進(jìn)行傳導(dǎo)，其速效性間于百草枯和草甘膦之間。

從鏈霉菌分離的酶膦絲菌素N-乙酰基轉(zhuǎn)移酶(PAT)通過(guò)乙?；呋疞-膦絲菌素轉(zhuǎn)化為其無(wú)活性形式。表達(dá)PAT的植物優(yōu)化形式的基因已經(jīng)在大豆中使 用以賦予大豆對(duì)草銨膦除草劑的耐受性，例如大豆事件A5547-127。因此與草銨膦耐受性性狀組合使用草銨膦除草劑可以作為一種有效管理草甘膦抗性雜草的非選擇性手段。

同時(shí)，隨著轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)玉米大面積種植，少量存活下來(lái)的昆蟲(chóng)/害蟲(chóng)經(jīng)過(guò)幾代繁殖后，可能產(chǎn)生抗性?？钩輨┺D(zhuǎn)基因玉米作為非抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因玉米，與轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)玉米以一定比例一并種植，可以延緩昆蟲(chóng)/害蟲(chóng)產(chǎn)生抗藥性。

已知外源基因在植物體內(nèi)的表達(dá)受到它們的染色體位置的影響，可能是由于染色質(zhì)結(jié)構(gòu)(如異染色質(zhì))或轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)元件(如增強(qiáng)子)接近整合位點(diǎn)。為此，通常需要篩選大量的事件才有可能鑒定出可以商業(yè)化的事件(即導(dǎo)入的目標(biāo)基因得到最優(yōu)表達(dá)的事件)。例如，在植物和其他生物體中已經(jīng)觀察到導(dǎo)入基因的表達(dá)量在事件間可能有很大差異；在表達(dá)的空間或時(shí)間模式上可能也存在差異，如在不同植物組織之間轉(zhuǎn)基因的相對(duì)表達(dá)存在差異，這種差異表現(xiàn)在實(shí)際的表達(dá)模式可能與根據(jù)導(dǎo)入的基因構(gòu)建體中的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)元件所預(yù)期的表達(dá)模式不一致。因此，通常需要產(chǎn)生成百上千個(gè)不同的事件并從這些事件中篩選出具有以商業(yè)化為目的所預(yù)期的轉(zhuǎn)基因表達(dá)量和表達(dá)模式的單一事件。具有預(yù)期的轉(zhuǎn)基因表達(dá)量和表達(dá)模式的事件可用于采用常規(guī)育種方法通過(guò)有性異型雜交將轉(zhuǎn)基因滲入到其他遺傳背景中。通過(guò)這種雜交方式產(chǎn)生的后代保持了原始轉(zhuǎn)化體的轉(zhuǎn)基因表達(dá)特征。應(yīng)用這種策略模式可以確保在許多品種中具有可靠的基因表達(dá)，而這些品種能很好的適應(yīng)當(dāng)?shù)氐纳L(zhǎng)條件。