[發明專利]一株杜仲內生短小芽孢桿菌及其應用

有效

• 申請號: 201510219845.4
• 申請日: 2015-04-30
• 公開（公告）號: CN104789509B
• 公開（公告）日: 2018-01-12
• 發明（設計）人: 丁婷;韓亞惠;陳方新;蘇博;龍建
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/00;A01N63/02;A01P3/00;A01P21/00;C12R1/07
• 代理公司: 江蘇銀創律師事務所32242
• 代理人: 何震花

技術領域

本發明屬于植物保護領域，尤其涉及一種短小芽孢桿菌及其在防治植物病害中的應用。

背景技術

化學農藥作為防治有害生物的一種有效手段，曾在病蟲害綜合防治，保證農林等作物穩產、高產等方面起到了重要作用。但是長期過分依賴化學農藥，特別是一些殘效期長和毒性大的農藥使用，以及一些地區對化學農藥的不合理使用，導致化學農藥在使用中產生了環境污染，人畜中毒，農藥殘留等問題。目前，化學防治的危害逐步被人們所認識，研制安全、高效、低毒、低殘留的新型生物農藥成為農藥研究領域的新熱點。

植物內生細菌(Endophytic bacteria)是一類其生活史的一定階段或全部階段生活在健康植物的各組織和器官內部，并不引起植物組織產生明顯病害癥狀的微生物。植物內生細菌普遍存在于植物體內，構成了植物體內的微生態系統，與宿主植物協同進化，形成了互惠共生的關系。由于植物內生細菌在植物體內有穩定的生存空間，且能產生與宿主植物代謝相同或相似的生理活性物質，因而能有效地抑制病原菌的侵染或提高宿主植物的抗逆、抗蟲、抗病的能力，促進宿主植物的生長發育，且具有安全、無殘留、不在人畜體內積累、防治效果專一等優點，為新型生物農藥和農藥先導化合物的研究和應用提供了美好的前景。當前，圍繞植物內生細菌或其代謝產物控制植物病害已成為研究的熱點，已有多項研究表明植物內生細菌或其代謝產物在植物病害防治中發揮著重要的作用。如Hinton等人將玉米內生陰溝桿菌(Enterobacter cloacae)作為種子保護劑，能有效防治玉米病害。田宏先等人分離的馬鈴薯組織內生細菌(Bacillus megatherium)對馬鈴薯環腐病有較好的田間防治及增產作用。何紅等人在辣椒中分離的內生枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，能分泌出環脂抗菌多肽，該物質對植物炭疽病菌和番茄青枯病菌等多種植物病原真菌和病原細菌有較強的抑制作用。

短小芽孢桿菌((Bacillus pumilus sp.)是自然界中廣泛存在的非致病細菌，對人無害，不污染環境，生理特性豐富多樣，是土壤和植物微生態優勢種群之一，可以產生豐富的具有潛在植物病害防治價值的抗菌物質，是植物病害生防微生物的重要組成部分(肖愛萍等,2003；Akhtar M,2008)。

本發明從杜仲植物體內分離到一株生防內生細菌短小芽孢桿菌DZBT01(Bacillus pumilus DZBT01)，并對該菌株進行了植物病原真菌的抑菌作用、防治小麥紋枯病害及促進小麥植株生長等方面研究。該發明為微生物農藥的進一步研制和開發提供優良的出發菌株。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種廣譜高效抑制植物病原真菌生長的短小芽孢桿菌。

本發明還要解決的一個技術問題是提供上述短小芽孢桿菌的用途。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案如下：

廣譜高效抑制植物病原真菌生長的短小芽孢桿菌DZBT01(Bacillus pumilus DZBT01)，是一種從杜仲植物根部篩選獲得的對多種植物病原真菌具有抑菌作用的生防細菌菌株，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，其保藏編號是CGMCC NO.10470，保藏日期：2015年1月30日。

短小芽孢桿菌DZBT01(Bacillus pumilus DZBT01)在牛肉膏蛋白胨培養基平板上菌落圓形，暗白色，不透明，邊緣整齊，中間有褶皺，為革蘭氏陽性菌，菌體短桿狀，周生鞭毛，好氧。生理生化特性：可以利用葡萄糖、阿拉伯糖、甘露醇產酸，接觸酶陽性，v-p反應陽性，可以水解酪素，不水解酪氨酸，不水解淀粉。16S rDNA基因序列已提交Genbank，登記號KM087337。將所測16S rDNA序列通過BLAST比對，能在Genbank中找到同源性非常高的相近菌株序列，與DZBT01菌株相似度最高的是Bacillus pumilus.MTCC B6033，ITS序列同源性達到100％。以ITS序列為基礎構建的系統發育樹，短小芽孢桿菌DZBT01與Bacillus pumilus.MTCC B6033同屬一個遺傳分枝，親緣關系十分接近，采用MEGA4.1軟件，鄰位連接法顯示短小芽孢桿菌DZBT01與相關種的ITS rDNA系統發育樹，進行了1000次的相似度重復計算，圖中發育樹節點只顯示Bootstrap值大于50％數值。